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酱油是我国传统酿造制品，呈鲜多肽的含量以及种类对酱油的品质具有重大影响，因而对酿造酱油的呈鲜多肽进行科学、系统的研究很有必要。目前呈鲜多肽主要通过人工感观评鉴的方法来实现，但人工感观评鉴的方法受影响因素众多，因而得出的数据缺乏足够的客观性以及一致性。为此，本文以可逆加成-断裂链转移（Reversible addition-fragmentation chain transfer,RAFT）活性自由基聚合法制备分子印迹固相萃取(Molecularly Imprinted Solid-phase Extraction，MISPE)微球，该微球可选择性分离酿造酱油中的L-谷氨酸以及呈鲜多肽，有效去除基质干扰，结合高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)，可实现酿造酱油中L-谷氨酸及呈鲜多肽的选择性分析检测。主要研究内容如下: (1)L-谷氨酸分子印迹聚合物（Molecularly Imprinted polymer, MIP）固相萃取微球的制备及表征 对硅胶微球进行RAFT改性，得到RAFT功能化硅胶微球。再以L-谷氨酸为模板分子，2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸为功能单体，N，N-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂，在硅胶微球表面包覆一层MIP薄膜，其最佳合成条件为:水-乙醇混合溶剂（V水∶V乙醇=3∶2）用量为15mL，L-谷氨酸用量为7.4 mg，2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸用量为82.9 mg，N，N-亚甲基双丙烯酰胺用量为370 mg，偶氮二异丁腈的用量0.22 mg，反应温度为58℃。对最佳条件下制备得到的印迹硅胶微球进行红外、扫描电镜、热重分析表征，结果表明印迹薄膜成功包覆在硅胶微球表面，印迹硅胶微球失重约为8％，表明印迹膜的厚度适中。 (2)MISPE柱的制备以及萃取条件的优化 将印迹硅胶微球装填到固相萃取柱中，用体积分数为50％的乙腈-水溶液对固相萃取柱进行活化。对淋洗剂、洗脱剂的种类以及用量进行优化，最后确定以40％的乙醇-水为上样溶剂，2mL的乙醇为淋洗剂，3mL的10％的乙酸-水为洗脱剂，同时，控制上样流速低于0.5 mL/min。在此条件下，MISPE柱对L-谷氨酸的萃取容量达到140μg/g，印迹因子为2.6。对MISPE柱进行重复利用实验，结果表明可循环使用次数在10次以上。对谷氨酸-天门冬氨酸-谷氨酸(Glu-Asp-Glu)、谷氨酸-天门冬氨酸(Glu-Asp)、丝氨酸-甘氨酸(Ser-Gly)、丝氨酸-甘氨酸-丝氨酸(Ser-Gly-Ser)分别过MISPE柱以及空白印迹固相萃取柱，结果表明其对四种寡肽的印迹因子分别为2.1、1.9、1.05、0.94。实验结果表明，印迹硅胶微球对端基氨基酸为谷氨酸的多肽具有较好选择性，因此可为下一步酿造酱油中呈鲜多肽选择性分析检测提供指导。 (3)MISPE-HPLC联用检测酿造酱油中的L-谷氨酸 建立MISPE-HPLC法测定L-谷氨酸，线性范围为1.47～58.85μg/mL，相关系数为0.9910，L-谷氨酸的检出限为44.1 ng/mL。用该方法测定浓度为1.47μg/mL以及7.35μg/mL的加标生抽样品中L-谷氨酸，回收率分别为80.6％、78.4％。用该方法测定浓度为1.47μg/mL以及7.35μg/mL的加标酱油原液样品中L-谷氨酸，回收率分别为82.2％、77.8％。