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睡眠剥夺和抑郁等状态下,肠道中特定菌群的结构和组成会发生改变,从而影响大脑和行为以及机体代谢功能;中药多酚类化合物可以调整肠道菌群,使之恢复动态平衡状态,其中的绿原酸也发现具有较好的抗抑郁作用。基于以上研究基础,本文利用前期绿原酸干预睡眠剥夺模型和ACTH诱导的抑郁模型大鼠实验所收集的粪便样本,进行大肠杆菌、双歧杆菌等5种特定肠道菌DNA的定量PCR检测和粪便GC-MS代谢组学全谱分析,以认识和评价绿原酸对大鼠SD应激及抑郁的干预作用。本研究的主要内容和结果如下: 1.绿原酸等对睡眠剥夺应激模型大鼠5种特定肠道菌群及粪便代谢物组的影响 利用改良“小平台水环境法”睡眠剥夺模型大鼠收集粪便样本,提取粪便总DNA,并根据五种肠道细菌16 SrRNA基因序列的特异性引物进行实时荧光定量。定量PCR检测结果说明绿原酸、咖啡和低因咖啡对肠道菌群总量具有一定的调整作用,对双歧杆菌和乳酸杆菌以及占肠道菌群大部分的拟杆菌具有一定的促进作用,并可以抑制有害菌如产气荚膜梭菌。之后采用GC-MS代谢组学方法分析粪样,结合PLS-DA多维及K-W单维统计分析,寻找差异性代谢物及相关代谢通路(p<0.05),系统地评价此应激对大鼠代谢网络的影响,总结出绿原酸类物质主要通过能量代谢及氨基酸代谢等发挥作用。 2.绿原酸对ACTH诱导的抑郁模型大鼠特定肠道菌群及粪便代谢物组的影响 在ACTH s.c.14天成功建立大鼠抑郁模型的基础上,收集粪便样本。提取粪便总DNA,进行实时荧光定量。定量PCR检测结果说明,ACTH注射没有减少肠道菌总量,但是降低了有益菌的含量,增加有害菌。CGA可以促进有益菌的生长,使肠道菌群恢复动态平衡。之后采用GC-MS代谢组学方法分析粪样,结合PLS-DA多维及K-W单维统计结果(p<0.05),寻找差异性代谢物及相关代谢通路,系统地评价抑郁对大鼠代谢网络的影响,CGA干预可以改善抑郁大鼠代谢,主要是通过能量代谢及氨基酸代谢发挥作用。 采用qRT-PCR技术检测特定肠道菌DNA的表达量、宏基因组测序技术对粪便中的微生物群体进行高通量测序和GC-MS粪便代谢组学方法探讨绿原酸对大鼠肠道菌群的影响以及其抗SD应激和抗抑郁的作用机制。