交泰丸改善睡眠碎片化大鼠睡眠结构和肠道损伤的机制研究

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目的:(1)探究交泰丸干预对睡眠碎片化大鼠的睡眠结构和脑电图功率的影响;(2)探究交泰丸干预对睡眠碎片化大鼠的肠道ROS累积损伤的影响;(3)探究交泰丸干预对睡眠碎片化大鼠血浆代谢物的改变及对生物钟的影响。方法:(1)采用睡眠剥夺仪对SD大鼠进行睡眠碎片化造模2周,同时进行交泰丸灌胃干预,采集2周末大鼠24h的脑电图和肌电图数据,FFT变换后分析大鼠睡眠结构和脑电功率谱的变化。记录大鼠体重变化,测定肝功能、肾功能、血脂的变化评估交泰丸的安全性。(2)使用DHE染色评估大鼠回肠、结肠、脑、肝脏、骨骼肌、脂肪等组织ROS累积,免疫荧光法评估肠道组织γH2Ax、TIA和Cleaved Caspase-3水平,透射电镜观察大鼠肠道超微结构变化,RT-q PCR和Western Blot检测肠道组织与氧化应激相关基因的m RNA和蛋白质的变化。使用交泰丸主要成分之一小檗碱干预Caco2细胞验证交泰丸对ROS的影响。16S r DNA测序分析肠道菌群变化。(3)全谱代谢组学检测交泰丸对大鼠血浆代谢物的影响。RT-q PCR和Western Blot检测HPPA和NALT对HT22、C2C12、Caco2细胞的Bmal1和PER2的影响。结果:(1)睡眠碎片化可以明显减少大鼠睡眠时长,交泰丸干预可以增加大鼠的睡眠时长,主要是NREMS时长。交泰丸可以降低大鼠清醒期的delta波段能量和REMS的theta波段能量。对睡眠碎片化大鼠给予交泰丸干预2周后,大鼠体重、肝肾功能和血脂无明显变化。(2)睡眠碎片化增加了大鼠回肠和结肠的ROS累积,交泰丸干预不降低ROS累积,但减少γH2Ax、TIA和Cleaved Caspase-3的表达,缓解大鼠肠道结构损伤。交泰丸可增加大鼠肠道内的阿克曼菌丰度。交泰丸增加大鼠AMPK磷酸化水平和Sirt3、PGC1α、GSR、SOD1、Bcl2的表达。小檗碱干预增加Caco2细胞内超氧阴离子水平,但没有明显增加细胞内H2O2水平。小檗碱干预相对H2O2干预可增加Caco2细胞AMPK磷酸化和Sirt3、GSR、Bcl2表达。(3)交泰丸干预可影响睡眠碎片化大鼠的血浆中多种代谢产物。其中HPPA和NALT,这两种在交泰丸干预大鼠中增加的物质,可增加HT22、C2C12、Caco2细胞内生物钟蛋白Bmal1的震荡幅度。结论:(1)交泰丸可以在一定程度上增加睡眠碎片化大鼠的NREMS时长,且2周用药安全。(2)交泰丸干预尽管不能减少睡眠碎片化大鼠回肠和结肠的ROS累积量,但细胞损伤的相关标志物降低,其可能通过AMPK磷酸化激活和Sirt3增加调节细胞内抗氧化系统从而减少细胞损伤。(3)交泰丸影响睡眠碎片化大鼠血浆代谢组,并可能通过HPPA和NALT增加影响生物钟蛋白Bmal1的震荡幅度,可能是其改善睡眠结构的机制之一。
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