金鸡脚假瘤蕨化学成分及生物活性研究

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金鸡脚假瘤蕨[Phymatopteris hastata(Thunb.)Pic.Serm.],在最新版的《中国植物志》中修订为Selliguea hastata。主要分布在中国南方大部分地区,为湖北省土家族的一种民间药物,药用部位为全草及孢子,性凉,味微苦、微辛,具有祛风除湿、解毒通淋的作用,主治小儿惊风、肺热咳嗽、痈肿疮毒等多种疾病。自1928年第一位日本学者对其化学成分展开研究以来,目前总共从该植物中提取鉴定了三十三个化合物,有四个化合物是新发现的化合物,主要是一些黄酮类、酚酸类、萜类、甾体类和脂肪酸衍生物等相关化合物,且部分化合物表现出良好的体外抗糖尿病及抗氧化活性。为进一步对其化学成分进行研究,本课题选择产自于福建龙岩的金鸡脚假瘤蕨,通过一系列的色谱分离方法对其化学成分进行了系统性地研究,从该植物中总共分离得到二十个化合物,包括一个新的protocatechuic acid methyl ester和一对新的外消旋体二氢黄酮苷类化合物,并对分离得到的单体化合物进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性、DPPH/ABTS自由基清除实验、抑菌实验等相关生物活性的研究。通过GC-MS对该植物的挥发性成分进行了研究,并基于挥发油TIC图谱辅助鉴定金鸡脚假瘤蕨中部分小极性化合物。主要研究结果如下:1、采用一系列的色谱技术,如硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、pre-HPLC以及重结晶等手段从金鸡脚假瘤蕨全草乙醇提取物(95%)中提取鉴定了二十个化合物。已知化合物是通过与文献数据比对来确定其结构的,而新化合物则是利用HR-ESI-MS、1D和2D NMR、ORD和酸水解等方法来确定结构的。分别为:香豆素(1)、邻羟基桂皮酸(2)、反式咖啡酸(3)、β-谷甾醇(4)、二十四烷醇(5)、胡桃苷(6)、(-)-/(+)-naringenin-7-O-α-L-rhamnopyranoside(7)、棕榈酸(8)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(9)、atroside(10)、protocatechuic acid methyl ester-4-O-(6’-O-protocatechuoyl)-β-D-glucopyranoside(11)、豆蔻酸二甘油酯(12)、山奈酚-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(13)、1-O-heptatriacontanoyl glycerol(14)、二羟基β-胡萝卜素(15)、扁蓄苷(16)、山柰酚-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(17)、山柰酚-3-O-[α-D-呋喃芹菜糖-(1-2)-α-L-呋喃阿拉伯糖]-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(18)、β-蜕皮甾酮(19)、反式草木樨苷(20)。其中,化合物7和11为首次从自然界中分离发现的新化合物,化合物2、9、13、15、18、19均为首次从该属植物中分离得到。2、利用p-NPG法测定了金鸡脚假瘤蕨粗提物以及分离得到的单体化合物的体外抗α-葡萄糖苷酶活性。其中,化合物1、10、11的IC50值分别为96±2.9、99±8.9、88±3.6μg/m L,均小于100μg/m L;化合物12的IC50值为168±1.7μg/m L,小于200μg/m L。在此基础上,探究了反应时间对酶活性抑制的影响,发现随着反应时间的延长,抑制率呈现先下降后上升的趋势,并不呈现时间依赖性。在对抑制酶活性动力学实验中,结果显示化合物11为非竞争性抑制,米氏常数为0.46±0.06 m M,化合物3为反竞争性抑制。3、采用DPPH、ABTS自由基清除实验评价了金鸡脚假瘤蕨粗提物及分离化合物在体外抗氧化活性。在粗提物抗氧化活性筛选实验中,正丁醇相在两组实验中均具有较低的IC50值(46.6±12.1μg/m L,0.0045μg/m L),表明其抗氧化效果较好。而单体活性筛选实验中,山奈酚-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(7)和扁蓄苷(8)在两组实验中均有较低的IC50值,化合物7在两组实验中的IC50值分别为0.0038μg/m L和0.0048μg/m L,化合物8在两组实验中的IC50值分别为36.0±8.3μg/m L和0.0049μg/m L,表明其在开发成抗氧化产品方面的潜力巨大。4、以大肠杆菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)为筛选模型,考察了金鸡脚假瘤蕨中分离得到的化合物对细菌的抑菌活性;以黑曲霉(A.niger)、青霉(P.notatum)以及Shnu20200520为筛选模型,考察了其对相关真菌的抑制活性。二羟基β-胡萝卜素(15)对一种细菌(S.aureus)有抑制作用,同时对两种真菌(P.notatum、Shnu20200520)具有抑制作用;山奈酚-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(13)对一种细菌(S.aureus)和一种真菌(P.notatum)有抑制作用,香豆素(1)、邻羟基桂皮酸(2)、二十四烷醇(5)仅对一种细菌(S.aureus)有抑制作用,而棕榈酸(8)和1-O-heptatriacontanoyl glycerol(14)仅对一种真菌有抑制作用。5、通过GC-MS对金鸡脚假瘤蕨挥发性成分进行了研究,并考察了n-hexane自动进样模式和固相微萃取(SPME)模式两种不同进样模式的检测结果,发现SPME模式的灵敏度要显著高于n-hexane自动进样模式。n-hexane自动进样模式在57.5 min内总共从该植物的挥发油中检测出40种成分,而SPME模式在45.0min内一共检测出了162种挥发性成分。此外,还在此基础上通过挥发油TIC图谱辅助鉴定金鸡脚假瘤蕨中部分小极性化合物。
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