随着经济和交通手段的日益发展，颅脑损伤的发生率和因伤致死率、致残率均逐年增加。从分子水平对颅脑损伤后可能存在的基因和蛋白表达异常进行研究，有助于进一步阐明颅脑损伤的机理，从而指导临床治疗，提高颅脑损伤的治愈率、降低死亡率和致残率。细胞凋亡（apoptosis），又称程序性细胞死亡（programmed celldeath，PCD）。它是细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的生理性死亡。细胞凋亡是多细胞生物生命过程中不可缺少的部分，它是保证多细胞生物个体正常发育成熟和维持正常生理过程所必须的。当组织细胞凋亡异常（过高或过低）时，可导致各种疾病的发生。Bcl-2（B cell lymphoma/leukemia 2）和Bax（Bcl-2 associatod x）均为细胞凋亡的调控基因，在细胞凋亡发生中起重要作用。Bcl-2基因编码26KD的膜蛋白，主要存在于线粒体外膜上，Bcl-2的过量表达能抑制多种因素诱导的细胞凋亡。Bax基因编码一个21KD的蛋白，Bax蛋白以同源二聚体的形式存在，但Bax的作用与Bcl-2完全相反，Bax/Bax二聚体在体内过量表达时，可促进细胞凋亡。本课题采用50只健康SD雄性大鼠并用改进的Feeney自由落体损伤装置进行致伤打击，应用分子生物学方法——脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（ednal－deOXynucleotdyl ransferase mediated nick endlabeling，TUNEL）以及免疫组织化学方法馏P法），分别于损伤后6小时。12小时。24 ’J’时。72／J’时和 168 ／J’时（7大）对损伤脑组织中的细胞凋亡状态和 Bcl。2、Bax免疫反应阳性的细胞进行观察、计数、并进行统计学处理，从分子水平来探讨细胞凋亡状态及Bcl。2、Bax蛋白的表达与严重颅脑损伤的关系，以阐明创伤性颅脑损伤的损伤机理，为临床上颅脑外伤的救治提供新的思路。 材料与方法 1．动物：选用健康雄性SD大鼠50只，体重2009左右。随机分为2组，分别为损伤组和未损伤组，每组25只。 2、致伤：两组大鼠均经氯胺酮（40wig）腹腔麻醉，用牙科磨钻在左顶骨久状缝后 1．sllllll。中线旁2石mm处钻一直径4。sfnm的骨窗。24／J’时后，损伤组采用改进的Feeney自由落体损伤装置进行打击，致伤冲击力为0刀88N·S，造成严重脑挫裂伤。未损伤组不予打击，余处理同损伤组。 3、取材：分别于打击后6小时、12小时、24小时、72小时和 168小时处死损伤组及未损伤组大鼠各5只，完整取出全脑，将脑组织制成石蜡标本，切片备用。 4、检测：采用TUN＊L法原位标记DN A片段检测凋亡细胞。采用驼您进行BCI＊2。Bax的兔疫组织化学染色。 5、观察记录：在Olympus－CH光学显微镜下观察T［J’NEL及Bcl－2、Bax免疫反应的结果，井计数，计算出平均阳性率（LI），数据用均数士标准差佰士 S）表示。 6、统计学处理：所有数据在计算机上用邪s引0刀恤WI叫OWS统计软件包进行数据统计处理。采用的统计方法有t检验和参数的相关性检验。 －2－ 结 果 1、在损伤组大鼠脑组织中，TUNEL阳性细胞数明显较多，统计结果显示，损伤后 6小时、12小时、24小时、72小时及 168小时（7大）组与相应的未损伤组之间均存在极显著性差异（P＜0刀1）。在损伤组内不同时间＊LJ’N＊L阳性细胞数也在发生变化，伤后72小时阳性细胞数达到一个较高的水平。 2、在未损伤组大鼠脑组织中，Bax亦有阳性表达，在损伤组大鼠中则呈明显的阳性表达，统计结果显示，损伤后 6小时、12小时、24小时、72小时及 168小时 门无）组与相应的未损伤组之间均极显著性差异（P＜0刀 1）。在损伤组内 Bax阳性细胞数随着时间也在发生变化，伤后72小时表达达到一个较高的水平。 3。在未损伤组大鼠脑组织中，B。l－2有较弱的表达，在损伤组大鼠中有阳性表达，统计结果显示，损伤后 6小时、12小时、24小时及 168小时（7无）组与相应的未损伤组之间存在显著性差异（P＜0．05）。在损伤组内BCI－2阳性细胞数随着时间也在发生变化，伤后24小时表达达到一个较高的水平。 4、由于Bax、BclZ在调节细胞凋亡中的作用相反且在脑损伤后表达均有增加，故本组计算了未损伤组与损伤组的＊＊刀B。卜2值，结果显示损伤组＊＊c卜2值大于未损伤组，统计结果显示，损伤后 6小时、12小时、24小时、72小时及 168小时（7天）组与相应的未损伤组之间均存在显著性差异（P＜0刀5），并且 Ba：Xus。12值随着时间亦有变化，伤后72小时该比值最大。 5、进一步分析随着时间的变化Bax、Bcl－2阳性细胞数及BaX／Bcl－2值与TUNEL阳性细胞数之间存在的关系，采用参数的相关性检验显示随着时间的变化Bax、Bcl－2阳性细胞数及Ba－c／Bcl－2值与TUNEL阳性细胞数之间不存在相关性，在统计学上有无显著意义（P＞0．05）。 。3－