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目的：蜂王浆(Royal Jelly，RJ)是6-18日龄青年工蜂的下咽头腺和上颚腺等腺体所分泌的特殊物质，为蜂王发育过程中的关键物质，有着较强的保健功能和医疗价值。阿尔茨海默病(Alzheimers disease，AD)是一种以β淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)级联假说为主要病因的进行性神经退行性疾病。本论文主要探讨用蜂王幼虫肠道酶酶解水溶性蜂王浆蛋白(Water Solution Royal Jelly，WSRJ)而制备蜂王浆多肽(Royal Jelly Peptides，RJP)的方法，并探讨制备的蜂王浆多肽对AD的经典模型-β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导SH-SY5Y细胞凋亡模型的保护作用。
方法：本论文以新鲜蜂王浆和冷冻保藏的幼虫为原材料，提取水溶性蜂王浆蛋白和幼虫肠道酶液，利用蜂王幼虫肠道酶酶解水溶性蜂王浆蛋白制备蜂王浆多肽，通过SDS-PAGE检测水解液中蛋白的剩余量，确定最佳水解时间，最佳反应pH值及肠道酶液与水溶性蜂王浆蛋白的最佳配比。利用不同分子量大小、不同浓度梯度的RJP，研究其对Aβ25-35诱导体外培养的SH-SY5Y人神经瘤母细胞凋亡的保护作用。利用倒置显微镜观察细胞形态变化、MTT比色法检测细胞活力的变化、乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测SH-SY5Y细胞培养液中LDH的释放量、流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化、DCFH荧光探针检测细胞内活性氧自由基(ROS)产生量的变化、western-blot检测凋亡前体蛋白Bax/Bcl-2比例关系的变化，评价不同分子量、不同浓度梯度的RJP对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用。
结果和结论：蜂王幼虫肠道酶酶解水溶性蜂王浆蛋白(WSRJ)的最佳酶解工艺：酶解时间为24h，酶解pH=8.5，肠道酶液与水溶性蜂王浆蛋白液的配比关系(蛋白含量比值)为肠道酶液：WSRJ=1:2.68(mg/mg)。细胞学实验证明，分子量大小为1-3kDa和3-5kDa的RJP可改善25μmol/L的Aβ25-35所造成的细胞形态损伤，提高MTT的代谢率，降低细胞培养液中LDH的释放量，降低细胞的总凋亡率，并呈剂量依赖关系。一定浓度的1-3kDa和3-5kDa的RJP还能减少细胞内ROS的产生，降低细胞线粒体凋亡途径中的相关蛋白Bax/Bcl-2的值。另外，在总体保护效果上，分子量为1-3kDa的RJP与3-5kDa的RJP较为接近。由此得出结论：利用蜂王幼虫肠道酶酶解水溶性蜂王浆蛋白的方法制备的蜂王浆多肽，能够抑制Aβ25-35导致的SH-SY5Y细胞的膜结构损伤和氧化应激，抑制线粒体介导的细胞凋亡通路的发生，从而对SH-SY5Y细胞起到保护作用。