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石墨烯量子点由于其具有极好的荧光特性而成为一种良好的细胞成像染料。另外由于其荧光光谱和荧光量子产率因其表面修饰的化学基团的改变而不同,因而石墨烯量子点的化学修饰引起了人们的广泛关注。不同的化学修饰方法修饰的石墨烯量子点在生物医学领域具有巨大的潜在应用价值。然而针对不同化学修饰方法制备的石墨烯量子点在细胞中的分布情况以及他们的细胞毒性进行的研究目前还很少见发表。在这篇文章中我们对以上问题进行了研究,具体方案如下: (1)三种带不同化学基团(NH2-,COOH-,DMF-)的石墨烯量子点的制备;NH2-GQDs(aGQDs)和DMF-GQDs(dGQDs)的制备采用的是从上至下的方法(top-down method),以氧化石墨烯为起始物;而COOH-GQDs(cGQDs)的制备采用的是从下至上(bottom-up method)的方法,是以柠檬酸为起始物的。 (2)用紫外可见光谱,透射电子显微镜,红外光谱三种方法对三种石墨烯量子进行表征;实验结果表明氨基,羧基,DMF三种基团成功地连接在石墨烯量子点上,三种石墨烯量子点已经成功制备。 (3)三种石墨烯量子点荧光光谱的测定,改变激发光的波长测定三种量子点的荧光光谱;实验结果表明aGQDs的荧光发射谱是随激发光波长的变大而红移的,当激发光波长从320 nm以20 nm为间隔增加到580 nm时,荧光光谱从470 nm变成了600 nm。而cGQDs和dGQDs的荧光发射谱不随激发光波长的改变而改变,他们的发射谱分别在450 nm和500 nm。 (4)分别将不同浓度(0,10,25,50,100,200μg/mL)的三种石墨烯量子点分别加入在6孔板中孵育了24 h后的A549和C6细胞中继续孵育12h,将细胞用4%的多聚甲醛固定后在荧光显微镜下观察。在不同光源(紫光,蓝光,绿光)激发下观察aGQDs,cGQDs,dGQDs三种石墨烯量子点在细胞内的分布以及他们对细胞的成像效果。实验结果表明:三种石墨烯量子点都随机地分布在细胞质基质中而不在细胞核中,说明他们只进入到细胞质,而没有进入到细胞核。在他们的浓度为50μg/mL时,细胞成像效果很好,在用紫外光源进行激发时,三种量子点发出的都是蓝光,当用蓝光激发时发出的是黄色的荧光。 (5)用MTT法研究了不同浓度(0,10,25,50,100,200μg/mL)的aGQDs,cGQDs,dGQDs对A549和C6细胞增殖的影响。实验结果表明高浓度的石墨烯量子点对细胞的增殖有一定的影响,但是即使在量子点浓度高达200μg/mL的情况下,细胞的相对增殖率值仍然高于80%,A549和C6细胞中获得了类似的结果。 (6)用台盼蓝法研究不同浓度(0,10,25,50,100,200μg/mL)的aGQDs,cGQDs,dGQDs是否引起A549和C6细胞死亡。实验结果表明三种石墨烯量子点都未引起细胞的死亡,即使他们的浓度高达200μg/mL时,A549和C6细胞中都获得了这样的结果。 (7)用流式方法对不同浓度(0,10,25,50,100,200μg/mL)的三种石墨烯量子点是否引起A549和C6细胞凋亡与坏死进行了探讨,实验结果表明即使三种量子点的浓度高达200μg/mL,他们依然具有比较好的生物相容性,未引起这两种细胞的凋亡与坏死。 (8)用拉曼光谱方法对用不同浓度(0,10,25,50,100,200μg/mL)的三种石墨烯量子点处理后的细胞进行检测。结果表明即使石墨烯量子点的浓度达到200μg/mL,与对照组细胞相比实验组细胞拉曼光谱未发现明显变化,在A549和C6细胞中都获得了这样的结果。拉曼光谱的实验结果为这三种石墨烯量子点的良好生物相容性提供了分子证据。