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在世界范围内,乳腺癌发病率逐年升高,严重威胁全球女性健康。传统的化学治疗手段存在着很多问题,如游离药物的快速清除、无选择性地体内分布、药物在体内失活,使得化疗结果达不到预期,甚至造成普遍的全身毒性,而近年来纳米给药系统(NDDS)的广泛研究发现,其在增加难溶药物的溶解度、实现肿瘤靶向性、提高药物的生物利用度、降低毒副作用、控制药物释放等方面发挥巨大优势。光动力治疗(PDT)在一些肿瘤治疗领域已被应用,将化学疗法和PDT联合起来,对于肿瘤的治疗非常有研究价值。基于此,本课题设计开发了一种具有还原响应性、肿瘤靶向性、联合光动力与化疗协同治疗以及可体内成像的多功能的纳米给药系统,以实现对CD44受体高表达的乳腺癌细胞靶向运送药物,在肿瘤高还原环境中响应性释药,联合近红外(NIR)光照射下实现PDT治疗并实现体内肿瘤成像。通过三步酰胺化反应,以透明质酸(HA)为亲水多糖骨架,胱胺为连接臂,依次连接二十二碳六烯酸(DHA)、二氢卟吩e6(Ce6),制备两亲性聚合物二氢卟吩e6-透明质酸-DHA(CHD),通过FT-IR和1HNMR以及紫外-可见吸收图谱进行表征,DHA的取代度为8.8,Ce6含量为15.3±0.3%。利用探头超声法制备空白和载药纳米粒,空白CHD纳米粒平均粒径为214.1±3.3nm,PDI 为 0.255±0.016,zeta 电位为-29.4±0.6mV;制备载药(多烯紫杉醇,DTX)纳米粒时,对DTX良溶剂和药质比进行了研究,在最优处方下,DTX载药量为9.28±0.83%,包封率为38.38±3.78%。载药后DTX/CHD纳米粒粒径有所减小,为 181.4±1.8nm,PDI 为 0.241±0.039,zeta 电位为-22.9±0.7mV。稳定性实验显示,DTX/CHD纳米粒在72h内粒径和zeta电位变化不显著,具有良好的稳定性。对纳米粒进行还原敏感性考察,纳米粒在还原环境中表现为荧光恢复和活性氧产生能力增强,DTX48h累计释放量为84.48±1.68%,与低还原环境的释放存在显著差异。利用CD44受体高表达的人乳腺癌MCF-7细胞对纳米粒进行体外生物学评价。利用共聚焦显微镜和流式细胞仪探究了 MCF-7细胞对CHD纳米粒的摄取行为,CHD纳米粒组在孵育1h和4h的细胞内荧光强度分别是游离Ce6溶液组的9.7和13.9倍,是HA预孵育组的1.7倍和1.9倍,证明纳米粒由CD44受体介导的内吞作用被摄取进入细胞,表现出其对CD44受体过表达的MCF-7细胞的亲和靶向性;利用cck-8对纳米粒的细胞毒性进行研究,在无NIR照射时,高浓度的CHD纳米粒(以Ce6计40μg/mL)无明显的细胞毒性,而结合PDT和化疗的DTX/CHD+NIR组,细胞活性仅为21.3±2.3%。细胞凋亡实验结果也表明联合治疗效果最优。利用溶酶体探针观测CHD纳米粒的溶酶体逃逸现象;利用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧,结果显示,在NIR照射下,CHD纳米粒处理的细胞产生活性氧能力高于游离Ce6;利用PI染色检测细胞周期,DTX/CHD+NIR实验组将细胞周期阻滞于G2/M期比率达97.33%;利用微管荧光探针对微管进行染色,显示DTX抑制微管解聚,形成微管束,发挥促进细胞凋亡的作用;以上结果表明DTX与PDT联合治疗显示有显著的治疗效果。利用Balb/c荷瘤小鼠进行体内生物学评价,小鼠活体成像结果显示,CHD纳米粒在肿瘤部位蓄积产生的荧光强度是游离Ce6的4.2倍,在动物水平上证明其4T1(小鼠乳腺癌)细胞靶向性;在抑瘤实验中,DTX/CHD+NIR治疗组的肿瘤体积最小;安全性评价也显示,DTX/CHD+NIR治疗组安全性良好,证明化疗和PDT联合治疗的优越性。综上所述,DTX/CHD纳米粒具有CD44受体靶向性、还原敏感性释药、化疗和PDT结合以及体内成像的优势,在体内外生物学评价中都表现出良好的抗肿瘤效果,并有良好的生物安全性,在对乳腺癌治疗中显现出巨大的潜力。