目的:卵巢癌作为女性生殖系统肿瘤中死亡率最高的癌症,治疗手段十分有限,极易发生耐药复发和转移,导致预后差。因此探究卵巢癌的发生发展机制对攻克治疗瓶颈具有重要意义。肿瘤干细胞（Cancer Stem Cells,CSCs）是肿瘤的种子细胞,具有强大的自我更新能力和分化潜力,是肿瘤的生长、转移、耐药、复发的根源和重要驱动力。但卵巢癌干细胞（Ovarian Cancer Stem Cells,OCSCs）干性维持的机制尚未明晰,需要进一步探索。环状RNA（circular RNAs,circ RNAs）作为一种新被关注的非编码RNA,具有组织特异性,通过多种机制参与肿瘤的发生发展。近年来,研究报道circ RNA尽管属于“非编码RNA”,但有些可以在体内编码产生功能多肽或蛋白质。本研究拟发现对OCSCs干性维持具有重要作用的circ RNA,并深入探究其调控OCSCs干性的机制,旨在发现新的逆转卵巢癌恶性进展的靶点。方法:1.OCSCs的诱导与鉴定:采用无血清非黏附悬浮培养OVCAR3和CAOV3卵巢癌细胞株,富集传代形成具有干性的球囊细胞OVCAR3 S和CAOV3 S,并通过q RT-PCR、流式细胞术、有限梯度稀释实验等验证其干细胞特性。2.Circ657的表达与成环验证:对OVCAR3和OVCAR3 S细胞以及卵巢上皮细胞HOSEpic（HOSE）样本进行基因芯片微阵列的差异分析,筛选出OVCAR3 S细胞中高表达的circ RNA657（circ657）。并通过q RT-PCR、稳定性实验、酶切实验验证circ657在卵巢癌细胞系中的表达情况以及它的环状情况。3.Circ657编码多肽能力评估:通过生物信息学软件预测circ657是否具备编码多肽的条件,并通过q RT-PCR和Western Blot对circ657翻译多肽的功能进行鉴定。4.Circ657调控OCSCs干性考察:在OVCAR3和CAOV3卵巢癌细胞株构建circ657过表达载体,在OVCAR3 S卵巢癌球囊细胞构建circ657沉默载体;采用CCK8、平板克隆形成实验、transwell迁移实验检测circ657对卵巢癌细胞的增殖、克隆形成能力、迁移能力等干性特性的影响。5.Circ657调控OCSCs干性机制探究:在OVCAR3和CAOV3卵巢癌细胞株构建circ657过表达载体,通过免疫荧光共定位实验检测circ657编码的多肽与GLI1的细胞定位情况,通过co-ip实验验证circ657编码的多肽与GLI1结合情况,进而探究circ657调控OCSCs干性的机制。结果:1.OVCAR3 S和CAOV3 S细胞具有OCSCs干性特性:通过OVCAR3和CAOV3诱导富集形成的OVCAR3 S和CAOV3 S细胞干细胞表面标志物CD133表达升高,迁移能力和单克隆细胞球形成能力增强,具有干性特性。2.Circ RNA-657在OCSCs中稳定存在并高表达:初步筛选出的circ657在OVCAR3 S和CAOV3 S细胞中显著高表达,且对Rnase R酶消化具有抵抗,环状结构稳定。3.Circ657具有编码多肽的能力:circ657拥有开放阅读框以及IRES元件,能够翻译多肽且翻译的多肽序列由166个氨基酸组成。4.Circ657通过编码多肽促进卵巢癌细胞增殖迁移等干性:过表达circ657的OVCAR3和CAOV3细胞中细胞增殖、迁移能力明显升高,而沉默circ657的OVCAR3 S细胞中细胞增殖、迁移能力明显降低;并且这种对细胞增殖迁移的干性特性的调控是通过其编码的多肽介导的。5.Circ657编码的多肽可能通过与GLI1互作调控卵巢癌细胞干性:circ657编码的多肽能够与GLI1直接结合,可能通过GLI1促进卵巢癌的干性,介导卵巢癌的发生与发展。结论:一种新型环状RNA——circ657在卵巢癌细胞及OCSCs中均高表达。Circ657能够编码一种新生多肽circ657-166aa并通过circ657-166aa促进卵巢癌细胞增殖、迁移等干性形成。circ657-166aa调控卵巢癌的恶性进展潜在机制可能是与GLI1互作激活Hedgehog信号通路。Circ657有望成为一种新的逆转卵巢癌细胞干性转化的潜在靶点。