超表达Taugt17b1深绿木霉工程菌的构建与生防效果评价

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木霉(Trichoderma spp.)广泛的分布于土壤、海洋及植物体等各种基质上,是具有广阔应用前景的生防真菌。有研究表明,深绿木霉分泌的Taugt17b1蛋白属于糖苷转移酶17家族(Glycosyl Transferase Family 17,GT17)。在真核生物中,大多数糖苷转移酶都存在于高尔基体中,但Taugt17b1基因在深绿木霉编码的是一种外泌的糖苷转移酶,也是深绿木霉中发现的唯一的一种外泌糖苷转移酶,这种外泌糖苷转移酶具有增强深绿木霉在寄主根部定殖能力的功能。本实验室前期研究中筛选获得一株具有良好生防效果的深绿木霉菌株H18-1-1,为进一步提升该木霉菌株的生防效果,本研究采用基因超表达技术在深绿木霉H18-1-1中超表达Taugt17b1基因,成功获得了该基因的超表达菌株,比较了超表达菌株与野生菌株相关表型及生防指标的差异。主要研究结果如下:(1)首先采用生物信息学的方法在深绿木霉菌株H18-1-1的基因组中成功地克隆到Taugt17b1基因,而后构建该基因的超表达载体,使用PEG(聚乙二醇)介导的木霉原生质体转化法将超表达载体成功地导入深绿木霉菌株H18-1-1中,获得H18-1-1的Taugt17b1基因超表达菌株。(2)超表达菌株遗传稳定性测定结果表明,超表达菌株连续培养10代后,Taugt17b1基因仍然能够稳定超表达。(3)采用荧光定量PCR测定Taugt17b1基因超表达菌株与野生菌株H18-1-1在沙培麦苗根部的相对定殖量,结果表明:超表达菌株的相对定殖量在检测的5 d内始终是野生型菌株2.5-4.6倍,说明Taugt17b1基因的超表达可以显著提高深绿木霉H18-1-1在小麦根部的定殖能力。(4)与野生型菌株H18-1-1相比,Taugt17b1基因超表达菌株菌落的生长速度有所增加;分生孢子产量与野生型菌株无明显差异。(5)Taugt17b1基因超表达可以提高深绿木霉菌株H18-1-1对假禾谷镰孢、禾谷镰孢菌、禾谷丝核以及轮枝镰孢菌的抑制效果。(6)温室盆栽测定结果表明,超表达菌株对小麦纹枯病的防治效果明显高于野生型菌株。此外,对小麦叶片的防御酶系的测定结果表明,超表达菌株和野生型菌株均能显著提高小麦叶片的超氧化物歧化酶、过氧化物酶以及过氧化氢酶的活性,且超表达菌株防御酶系的酶活性普遍高于野生型菌株。(7)温室盆栽测定超表达菌株和野生型菌株对小麦的促生效果发现,使用超表达菌株处理的小麦,其地上部和地下部鲜重指标均均高于野生型菌株,有比较明显的促生效果;对小麦根系活力测定发现,采用超表达菌株处理的小麦,其根系活力显著高于野生型菌株。超表达菌株和野生型菌株与对照相比,上述比较的各项指标均存在显著差异。以上结果表明,Taugt17b1基因超表达可以明显提高深绿木霉H18-1-1菌株的菌落生长速度、防病促生效果、防御酶系活性以及根系定殖能力,进而提高木霉菌株H18-1-1的生防效果。
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