目的:通过网络药理学的研究方法,对丹参酮ⅡA治疗心肌损伤多成分、多靶点、多途径的复杂网状关系进行分析,研究结果初步预测丹参酮ⅡA治疗心肌损伤的生物学机制。通过动物和细胞水平分别建立心肌损伤模型,从体内和体外两个方面探讨P53信号通路在丹参酮ⅡA治疗心肌损伤中的作用机制,旨在为深入研究丹参酮ⅡA防治心肌损伤的作用机制提供新的实验证据。方法:利用数据库平台和文献检索,筛选出药物的活性靶点和疾病的基因靶点,再经过David数据库和KEGG分析,从而可以得出药物防治疾病的药效化学活性成分、疾病相关作用靶点和可能参与治疗过程的细胞信号转导通路。再分为动物实验和细胞实验,分别从体内和体外实验验证网络药理学预测的生物学机制。动物实验部分:HE染色镜下观察SD大鼠心肌组织病理结构,对SD大鼠进行LDH、CK、SOD和MDA的含量检测,RT-q PCR检测P53、Bax、Bcl-2、Caspase-3 m RNA表达水平,Western blot检测P53、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平。细胞实验部分:CCK-8法测定细胞活力来筛选丹参酮ⅡA和美托洛尔含药血清干预H9C2心肌细胞的最适浓度,通过Tunel法检测细胞凋亡情况,对H9C2心肌细胞进行LDH、CK、SOD和MDA的含量检测,RT-q PCR检测P53、Bax、Bcl-2、Caspase-3 m RNA表达水平,Western blot检测P53、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平。结果:网络药理学分析得到信号转导通路包括PI3K-Akt、P53、HIF-1、TNF等,其中P53信号通路上的重要机制为细胞凋亡,且通路上细胞凋亡过程的重要基因包括P53、Bax、Bcl-2、Caspase-3等。实验动物部分:HE染色镜下观察正常组大鼠心肌组织未见明显病理变化,模型组大鼠心肌组织出现明显的排列紊乱、炎性浸润和心肌纤维断裂等病理损伤,模型加药组大鼠心肌组织的病理变化较模型组均明显减轻。与模型组比较,丹参酮ⅡA组SD大鼠中LDH、CK、MDA水平显著降低,SOD含量升高。RT-q PCR实验与模型组相比,正常组和药物组心肌组织中P53、Bax、Caspase-3 m RNA表达明显下调,Bcl-2 m RNA表达显著上调。WB实验与模型组相比,正常组和药物组心肌组织中P53、Bax、Caspase-3蛋白表达明显下调,Bcl-2蛋白表达显著上调。细胞实验部分:CCK-8法测定7.5%丹参酮ⅡA含药血清,10%美托洛尔含药血清作为干预H9C2心肌细胞的最适浓度。Tunel法测定与模型组比较,丹参酮ⅡA组和美托洛尔组大鼠心肌细胞凋亡率降低。与模型组比较,丹参酮ⅡA心肌细胞中LDH、CK、MDA活性显著降低,SOD含量升高。RT-q PCR实验与模型组相比,正常组和药物组心肌细胞中P53、Bax、Caspase-3m RNA表达明显下调,Bcl-2 m RNA表达显著上调。WB检测与模型组相比,正常组和药物组心肌细胞中P53、Caspase-3和Bax蛋白表达明显下调,Bcl-2蛋白表达显著上调。结论:丹参酮ⅡA可以明显改善异丙肾上腺素致心肌缺血损伤大鼠的病理结构,能降低H9C2心肌损伤细胞的凋亡率,能通过减少氧化应激起到保护心肌损伤的作用,调控细胞内凋亡蛋白的表达。提示丹参酮ⅡA治疗心肌损伤的机制多与氧化应激和细胞凋亡密切相关,主要是通过调节P53信号通路上的凋亡蛋白P53、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达水平。