绵枣儿捕获二羰基化合物作用物质基础研究

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糖尿病是由于胰岛素绝对或者相对不足引发的以慢性高血糖为主要表现的临床综合病征,是严重危害人类健康的内分泌性疾病。糖尿病及其慢性并发症已成为人类第三大死亡原因。大量研究表明,蛋白质非酶糖基化终产物(AGEs)是在糖尿病并发症中发挥重要作用的物质。它们通过直接获取蛋白质或引起蛋白质交联而影响其结构和功能,激发某些关键细胞信号通路和释放细胞因子、炎症因子等,导致糖尿病并发症的发生。根据文献报道,二羰基化合物是形成AGEs的关键中间体,通过有效地减少二羰基化合物的数量抑制AGEs的生成进而降低糖尿病并发症的发病几率,是减少糖尿病并发症产生的有效途径。已有研究报道高异黄酮类化合物具有抑制蛋白质非酶糖基化活性,而绵枣儿含有大量的高异黄酮类成分,但目前对于绵枣儿是否具有抑制蛋白质非酶糖基化活性以及捕获二羰基化合物活性却鲜有研究和报道,因此,本论文选择绵枣儿作为研究对象,对其捕获二羰基化合物活性的物质基础与作用机制开展研究。本论文首先采用经典的蛋白质非酶糖基化活性模型对绵枣儿80%乙醇粗提取物和大孔吸附树脂各个乙醇洗脱部位进行活性初筛,结果表明,在80μg/m L时,绵枣儿80%乙醇粗提取物及各乙醇洗脱部位(10%、30%、50%、70%、95%)均体现了良好的蛋白质非酶糖基化抑制活性,抑制率分别为52.38%,70.10%,92.76%,82.10%,66.10%,76.57%,阳性药氨基胍浓度为500 m M抑制率为41.90%。采用高效液相分析手段建立了捕获二羰基化合物活性模型,以氨基胍为模型阳性药,丙酮醛为模型底物,筛选得到底物浓度为0.32 m M,反应时间为48 h,孵育温度为37oC,p H为7.4作为模型条件。运用该模型对绵枣儿80%乙醇粗提取物和不同浓度的乙醇洗脱部位(10%、30%、50%、70%、95%)进行活性筛选,研究结果表明,95%乙醇洗脱部位体现了最高的捕获二羰基化合物活性为97.70%。采用大孔吸附树脂柱色谱、十八烷基键合硅胶柱色谱以及高速逆流色谱、制备液相色谱等手段研究绵枣儿的化学成分,从中分离得到11个化合物。综合运用理化性质、质谱和核磁共振波谱等数据鉴定化合物的结构,其中4个新化合物命名为scillanostaside M-1(1),scillanostaside M-2(2),scillanostaside M-3(3),scillanostaside M-4(4),7个已知化合物分别为3-(4-羟基苄基)-5-羟基-7,8-二甲氧基苯并二氢吡喃-4-酮(5),5-羟甲基糠醛(6),scillascilloside E-2(7),scillasclloside E-3(8),scillanostaside C(9),scillanoside L-1(10),scillascilloside G-1(11)。对从绵枣儿95%乙醇洗脱部位中分离得到的高异黄酮类单体化合物3-(4-羟基苄基)-5-羟基-7,8-二甲氧基苯并二氢吡喃-4-酮进行体外捕获二羰基化合物活性的研究,结果表明,当该化合物浓度为0.32 m M时,对二羰基化合物的捕获率为44.48%。本课题通过研究绵枣儿中高异黄酮对二羰基化合物的捕获作用,为后续绵枣儿的综合开发利用提供了科学依据,具有重要的学术价值和应用前景。
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