黑骨藤苷抑制巨噬细胞活化改善恶唑酮诱导的特应性皮炎的研究

来源 :桂林医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rgy1983
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目的本文旨在研究黑骨藤苷(Periploca forrestii Schltr Saponin,PFS)对恶唑酮诱导的特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)小鼠的治疗作用和对M2巨噬细胞极化作用的影响。方法用HPLC-MS/MS鉴定黑骨藤苷并对其中有效成分杠柳毒苷进行含量测定。体内实验:通过恶唑酮重复刺激BALB/c小鼠耳部34d建立AD模型。从14d开始,阳性药物组和给药组分别给予小鼠氢化可的松(Hydrocortisone,HC)和PFS灌胃20d。造模期间测量小鼠耳部肿胀厚度并进行临床评分。采用H&E染色、甲苯胺蓝染色和一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase,NOS)2及精氨酸酶(Arginase,Arg)1免疫组化染色来检测小鼠病理组织学的变化情况;采用ELISA、Western blot和RT-PCR检测PFS对AD小鼠相关炎症因子和巨噬细胞相关因子的表达水平的影响。体外实验:用巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)刺激BALB/c小鼠骨髓细胞,诱导成骨髓诱导巨噬细胞(Bone marrow derived macrophages,BMDM,即M2巨噬细胞),再用LPS诱导M2巨噬细胞极化成M1巨噬细胞。MTT测定不同剂量PFS对BMDM细胞活性的影响;免疫荧光染色和Western blot检测PFS对M1/2巨噬细胞极化的相关表型特征因子表达的影响。结果:HPLC-MS/MS检测结果显示:黑骨藤苷含活性成分杠柳毒苷0.4%(g/g)。体内实验结果显示:PFS显著降低AD小鼠耳部肿胀程度和临床评分;PFS减轻AD小鼠表皮增厚和炎性细胞浸润的情况,抑制肥大细胞侵润及脱颗粒,下调耳组织中NOS2和Arg1阳性细胞的表达;PFS显著降低AD小鼠血浆Ig E和炎症介质表达水平;PFS下调AD小鼠炎性细胞因子和巨噬细胞相关因子蛋白及基因的表达。体外实验结果显示:在0.2-20μg/m L范围内,PFS对BMDM具有一定的促增殖作用;免疫荧光染色显示,LPS诱导M1巨噬细胞分化及CD68因子的产生,PFS能干预LPS诱导M2巨噬细胞极化为M1巨噬细胞以及抑制M2巨噬细胞极化相关蛋白的表达。结论:在恶唑酮诱导的AD小鼠模型中,PFS治疗可以改善小鼠AD炎症反应。PFS通过抑制AD小鼠中炎性介质和相关巨噬细胞因子的表达来防治皮肤损伤;PFS通过抑制LPS诱导M2巨噬细胞极化中相关因子的表达来抑制炎性M1巨噬细胞的生成。因此,PFS可能是一种通过调节巨噬细胞的活化来有效治疗AD炎症的药物。
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