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目的:探索人IL-31在原核细胞中的表达、纯化和复性的方法，研究人IL-31与皮肤炎症的相关性。
方法:(1)将含有表达质粒pET-32a/rhlL-31和pET-28a/rhlL-31的重组菌Ecli.BL21(DE3)分别37℃培养，用IPTG诱导表达，用SDS-PAGE初步观察重组蛋白rhlL-31的表达量并对其进行初步分析。对两种表达菌株分别进行连续传代，比较其稳定性和蛋白表达效率，选择较稳定、表达效率较高的菌株作为后续研究的工程菌。(2)将目的蛋白条带送检进行氨基酸序列分析。(3)破碎菌体，洗去杂蛋白，溶解包涵体，过Ni-NTA琼脂糖凝胶FF柱纯化。(4)对纯化产物进行透析复性。(5)Brad-Ford法测蛋白浓度，SDS-PAGE和薄层扫描分析纯化产物中目的蛋白的纯度和含量。(6)用获得的复性后rhIL-31蛋白以不同的剂量对BALB/C小鼠进行分组皮内注射，观察其皮肤和行为变化，7天后取注射部位皮肤作石蜡切片并进行HE染色，观察皮肤组织的炎性细胞浸润情况；同时作小鼠外周血常规检测，观察其外周血的细胞学变化；眼球采血收集血清，检测IL-4，IL-10，IFN-γ水平，分析其外周血Th1/Th2细胞的平衡变化。(7)无菌分离人外周血淋巴细胞，采用MTT法检测不同浓度rhIL-31对人淋巴细胞增殖的影响。
结果:(1)pET-32aJrhIL-31和pET-28a/rhIL-31在E.coli.BL21(DE3)中均获得表达，反复多次试验证实，前者能较稳定而高效地表达rhIL.31。(2)氨基酸序列分析证实，我们获得的重组蛋白与人IL-31氨基酸序列一致。(3)pET-32a/rhIL-31在E.coli.BL21(DE3)中37℃诱导过夜时表达效率达到最高，为29％，可溶性包涵体中rhlL-31的纯度为34％，含量占rhIL-31总量的19.9％，经Ni-NTA琼脂糖凝胶FF柱纯化，获得纯度为83％的目的蛋白产物，rhIL-31含量占rhIL-31总量的16.5％，过柱后蛋白平均得率为32.4％。(4)复性后重组蛋白有生物学活性，能够刺激BALB/C小鼠皮肤炎症反应，出现挠抓、脱毛、躁狂等现象，皮肤病理切片显示处理组注射部位表皮增厚，角质层肥厚，真皮及皮下均有不同程度的炎性细胞浸润，以中性粒细胞和淋巴细胞为主，并在一定范围内呈剂量效应依赖关系。(5)小鼠外周血常规显示，受试各组外周血中性粒细胞和嗜酸性粒细胞比例均较对照组高，并在一定范围内呈剂量效应依赖关系。(6)小鼠血清学检测提示，进行皮内rhIL-31注射的组别，其IL-4、IL-10、OL-4/IFN-γ)平均水平均较正常对照组有所升高，具有统计学意义。(7)MTT实验提示，rhIL-31对人外周血淋巴细胞增殖情况有一定的抑制作用。
结论:(1)Ecoli.BL21(DE3)中pET-32a/rhIL-31的表达效率较pET-28a/rhIL-31高且稳定，表达效率在37℃过夜时最高，占菌体蛋白总量的29％，可溶性包涵体中rhIL-31的纯度为34％，含量占rhIL-31总量的19.9％，经Ni-NTA琼脂糖凝胶FF柱纯化，获得纯度为83％的目的蛋白产物，rhIL-31含量占rhIL-31总量的16.5％，过柱后蛋白得率平均为32.4％。(2)rhIL-31可刺激BALB/C小鼠出现脱毛和皮肤炎症，能导致小鼠Th1、Th2相关细胞因子水平的改变，使其向Th2型细胞应答偏移，这与人类特应性皮炎的病理以及血清学改变相似，暗示IL-31可能与特应性皮炎等皮肤炎症的发病机制有关，在Th1、Th2细胞应答的平衡中发挥一定作用。(3)本研究为rhIL-31在大肠杆菌中的表达、纯化以及复性提供了可行的技术路线，动物试验结果为后续的IL-31皮肤炎症相关性研究以及特应性皮炎发病机制的探索和治疗提供线索。