利用局部照射促进间充质干细胞归巢大鼠放射性损伤大血管的研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ivanny
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背景:放射性血管炎是恶性肿瘤放疗治疗过程中最常见的副作用之一,通常发生在照射区域内的血管系统。间充质干细胞(MSC)移植对于放射性损伤具有一定治疗作用。但是,在传统大鼠放射性血管损伤模型中,我们观察到MSC向放射损伤血管归巢的数量很少。究其原因,可能是由于在传统的模型中,MSC不仅归巢到被照射血管,还向相邻被照射的非血管组织迁移。结果,单位组织体积内归巢MSC数量显著降低,影响对归巢MSC的检视。为验证这一科学假说,本研究利用RT(放射)-plus-TX(移植)方法,使得只有目标血管接受照射,而邻近组织被完全保护、不被照射,观察MSC向目标血管归巢率能否得到提高。目的:探索局部照射能否促进MSC向大鼠放射性损伤大血管归巢。方法:在传统模型(RT-only组)中,用160KV X线35Gy单次剂量照射大鼠腹主动脉,在照射过程中使用铅屏蔽设备将X射线的照射限制在腹部中央3 cm×3cm的正方形区域内,腹腔内的脏器,特别是小肠和结肠,推离腹中央受辐射的区域,以防止这些脏器受到辐射。在实验模型(RT-plus-TX)中,取上述被照射大鼠的一段1.5cm长腹主动脉,原位移植到受体鼠中。为了避免发生免疫排斥反应,供体鼠与受体鼠均为F344近交系大鼠。移植术后90天取被照射腹主动脉送检。苏木精-伊红和Masson染色用于血管病变的评估,抗生物素蛋白-生物素复合物技术用于分析组织切片中过氧化物酶(MPO)的表达。QPCR检测组织中炎症因子TNFα、TGFβ、IL-1β、IL-2的表达。最后,利用荧光显微镜观察并计数组织中GFP标记MSC的定植数量,利用PCR检测性别决定基因Sry水平,以此来评估MSC向被照射血管的归巢效率。结果:与对照组相比,RT-only组与RT-plus-TX组主动脉出现纤维化和内膜增生,两组炎性因子TNF-α、TGF-β、IL-1β和IL-2表达水平升高。静脉输注MSC后,RT-plus-TX+MSC组中GFP标记的细胞以平均3.30/HPF密度定植在内膜层,而在RT-only+MSC组中几乎没有观察到GFP标记的细胞。而且RTplus-TX+MSC组的Sry基因水平明显高于RT-only+MSC组。对比RT-plusTX+MSC组和RT-only+MSC组的组织切片发现前者内膜厚度明显低于后者,PCR结果显示RT-plus-TX+MSC组受照射主动脉的TGF-β水平低于RT-only+MSC组。结论:局部照射可以促进MSC向放射性损伤大血管归巢。
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