【摘 要】
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目的:通过体内和体外实验,探索ERK5对动脉粥样硬化中巨噬细胞极化的调控作用和冠心康抗动脉粥样硬化的作用机制,并为进一步了解动脉粥样硬化的发病机制以及探索冠心康抗AS的作用机制提供新的理论依据。方法:1.体外实验:1)含药血清的制备:SD大鼠分为空白、冠心康和辛伐他汀组,给予0.9%生理盐水、冠心康水煎剂（生药9.99g/kg/d）和辛伐他汀水溶液（21.8mg/kg/d）干预,制备含药血清。2)
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目《基于活化巨噬细胞ERK5信号通路介导的胞葬作用探讨冠心康防治动脉粥样硬化的作用机制》（项目编号81573739）；
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目的:通过体内和体外实验,探索ERK5对动脉粥样硬化中巨噬细胞极化的调控作用和冠心康抗动脉粥样硬化的作用机制,并为进一步了解动脉粥样硬化的发病机制以及探索冠心康抗AS的作用机制提供新的理论依据。方法:1.体外实验:1)含药血清的制备:SD大鼠分为空白、冠心康和辛伐他汀组,给予0.9%生理盐水、冠心康水煎剂（生药9.99g/kg/d）和辛伐他汀水溶液（21.8mg/kg/d）干预,制备含药血清。2)细胞分为空白、模型、冠心康和辛伐他汀以及加入抑制剂的模型、冠心康和辛伐他汀,应用ox-LDL和LPS干预RAW264.7细胞建立M1型巨噬细胞模型,XMD8-92抑制ERK5表达,造模后含药血清干预24小时,应用RT-qPCR技术和蛋白印迹法、美联免疫吸附测定法检测iNOS、MCP-1、Arg-1、IL-10mRNA和蛋白的表达。2.体内实验:1)LysMCre+LDLR-/-小鼠和 LysMCre+LDLR-/-ERK5-MKO 小鼠分别随机分为模型组、冠心康组和辛伐他汀组,高脂饲料喂养12周建立模型,造模12周后给予0.9%生理盐水、冠心康水煎剂（14.43g/kg/d）和辛伐他汀溶液（2.6g/kg/d）灌胃,12周后取材;2)检测冠心康对小鼠血脂和体重的影响、HE染色法观察主动脉窦的斑块情况;3)免疫组化法检测斑块极化相关细胞因子IL-10和MCP-1的表达的情况;酶联免疫吸附测定法检测主动脉匀浆中MCP-1的浓度。4)RT-qPCR技术和蛋白印迹法检测冠心康对主动脉上极化相关MCP-1,iNOS,Arg-1,IL-10等因子mRNA和蛋白的表达的影响。结果:1.体外实验:1)与模型组细胞相比,加入抑制剂后细胞iNOS、MCP-1、IL-10、Arg-1的mRNA表达降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）;iNOS、ERK5和IL-10蛋白的表达降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）,细胞上清液MCP-1的浓度显著降低,差异具有显著统计学意义（P＜0.01）;2)较模型组相比,冠心康含药血清下调iNOS和IL-10 mRNA和蛋白的表达,差异具有统计学意义（P＜0.05）,下调MCP-1mRNA和细胞上清液中MCP-1的浓度,差异具有显著统计学意义（P＜0.01）;加入抑制剂后,与模型+抑制剂组相比,冠心康含药血清组MCP-1 mRNA以及IL-10mRNA的表达升高（P＜0.05）,IL-10蛋白的表达降低（P＜0.05）。与冠心康组相比,冠心康+抑制剂组IL-10与iNOS mRNA和蛋白的均下调（P＜0.05）。2.体内实验:1)与LDLR-/-模型组小鼠比较,ERK5-MKO-LDLR-/-模型组小鼠体重增加（P＜0.05）,血清TG升高（P＜0.05）,血清TC、LDL升高但不具有统计学意义（P＞0.05）;动脉粥样斑块相对管腔面积（PA/LA）增加（P＜0.05）,斑块MCP-1与IL-10的表达降低（P＜0.01）,主动脉上MCP-1 mRNA的表达降低（P＜0.05）,iNOS、ERK5、Arg-1和IL-10的蛋白表达降低（P＜0.05）,组织匀浆中MCP-1的浓度显著降低（P＜0.01）。2)与LDLR-/-模型组小鼠相比,冠心康可以控制小鼠体重（P＜0.05）、减少动脉粥样斑块相对管腔面积（PA/LA）（P＜0.05）,下调血清内TG含量（P＜0.05）,与ERK5-MKO-LDLR-/-模型组相比,冠心康可以下调血清TG、TC和LDL（P＜0.05）,减少动脉粥样斑块相对管腔面积（PA/LA）（P＜0.05）。3)与LDLR-/-模型组小鼠相比,冠心康可以下调MCP-1和IL-10在动脉粥样硬化斑块的表达（P＜0.05）,抑制主动脉上MCP-1和iNOS、IL-10mRNA的表达（P＜0.05）,抑制主动脉iNOS、IL-10蛋白的表达（P＜0.05）,显著下调主动脉匀浆MCP-1的浓度（P＜0.01）;与ERK5-MKO-LDLR-/-模型组相比,冠心康上调斑块IL-10的表达（P＜0.05）。结论:1)ERK5的特异性缺失会导致动脉粥样硬化小鼠体重增加,脂质代谢紊乱加重,主动脉窦AS斑块的相对管腔面积增大,对M1型巨噬细胞标志性细胞因子的表达具有抑制作用,对M2型巨噬细胞标记因子的表达的调控具有双向性。2)冠心康可以控制AS小鼠的体重和血脂水平,抑制M1型巨噬细胞相关细胞因子的表达,对M2型巨噬细胞相关细胞因子的表达具有双向调节作用,对动脉粥样硬化的发展具有显著改善作用。
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