哮喘小鼠肺泡灌洗液及尿液中3-溴酪氨酸水平的研究

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目的探讨3-溴酪氨酸在哮喘小鼠肺泡灌洗液及尿液中含量的变化及与哮喘的关系。方法Balb/c雌性小鼠48只,6~8周龄,随机分为对照组和实验组,每组24只。实验组于实验第1天和第14天使用注射器腹腔注射致敏液0.2 mL。进针时针头朝头方向刺入皮肤,到达皮下后,向前推进3~5 mm,然后使针头与皮肤呈45°刺入腹膜。针头刺入后可感抵抗力消失,回抽无血液可注入致敏液。每0.2 mL致敏液含鸡卵蛋白(OVA)800μg和氢氧化铝1mg。对照组同样方式腹腔注射0.2 mL磷酸盐缓冲液(PBS)。实验组于实验开始第22~28天,用0.4 mL OVA溶液(10g/L)雾化,每天1次,连续7d,每次30 min。对照组则替换为0.4 mL PBS雾化7d,每天1次,每次30 min。观察并记录两组小鼠的表现。均于实验第29天处死两组小鼠。鼠血液的提取两组小鼠共48只称量体重,按0.2ml/20g腹腔注射4%水合氯醛麻醉;用镊子快速取出眼球,获取小鼠血液。将获取的样品保存在液氮中。小鼠尿液的提取采用颈椎脱位法处死对照组和实验组各24只小鼠。首先将小鼠置于手术台上,用左手拇指和食指按压头部和颈部。然后右手抓住老鼠尾部,向后向上牵拉,导致颈椎脱位,实验小鼠立即死亡。在死亡前后,用EP管收集小鼠留下的尿液。将获取的尿液样品保存在液氮中。小鼠肺泡灌洗液的提取将颈椎脱位法处死的小鼠固定在手术台上。手术刀切开小鼠咽喉处皮肤,用镊子分开气管。手术线结扎小鼠右侧肺主支气管。使用眼科剪于咽喉稍下处的支气管斜切一小口。插入静脉留置针,手术线固定。注射器抽取0.4 mL PBS缓冲液反复灌洗3次,回抽的液体放入EP管中,并液氮保存。小鼠肺组织的提取获得小鼠肺泡灌洗液后,接着分离出小鼠右肺,每只小鼠取一大小约1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm的肺组织,并浸润于40 g/L多聚甲醛中固定。结果实验组小鼠雾化激发后逐渐出现打喷嚏、烦躁不安、呼吸加快等症状,符合嗜酸性粒细胞性哮喘小鼠的症状,而对照组小鼠无此症状。两组小鼠在实验中均无死亡。实验组小鼠肺泡灌洗液中3-溴酪氨酸的含量明显高于对照组,差异有统计学意义(t=4.25,P〈0.05)。尿液中3-溴酪氨酸的含量明显高于对照组,差异有统计学意义(t=4.56,P〈0.05)。实验组肺泡灌洗液3-溴酪氨酸含量与肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数呈正相关(r=0.89,P〈0.05),尿液中3-溴酪氨酸含量与肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数呈正相关(r=0.46,P〈0.05)。结论3-溴酪氨酸在哮喘小鼠肺泡灌洗液及尿液中高表达,其与哮喘小鼠的气道炎症有着密切的关系。因此通过检测肺泡灌洗液及尿液中3-溴酪氨酸的水平有可能为哮喘的诊断提供帮助。
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