郁金散及其拆方对奶牛子宫内膜炎病原菌的抑菌活性及抗炎作用研究

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子宫内膜炎是奶牛生产中最为常见的主要疾病之一,若不及时治疗或治疗不当,非常容易导致奶牛发情紊乱、屡配不孕,从而使得奶牛养殖效率低,严重的甚至引起全身感染,发生败血症,造成死亡。因此做好子宫内膜炎的预防和治疗,可有效提高牛场的生产效益。本试验对传统中药复方进行拆方和药效研究,旨在对传统中药复方进行优化、筛选,以提供有效治疗奶牛子宫内膜炎的中药组方并对其进行抗炎效果研究,为新兽药研发提供科学依据。1.传统中药复方及其拆方的体外抑菌试验:以体外抑菌作用为指标,采用正交t值法对郁金散进行主要药味分析及优化组合研究,评估该组方对奶牛子宫内膜炎的3种主要致病菌的抑菌效果。结果表明,郁金散拆方对于金黄色葡萄球菌的最佳抑菌组合为诃子、大黄、黄连、黄柏,对于大肠杆菌的最佳抑菌组合为诃子、黄芩、黄连,对于链球菌的最佳抑菌组合为郁金、黄连、黄柏,根据各药味对3种试验菌D值的贡献,最终确定具有较好抑菌作用的药物组合为诃子、黄连。组合方剂量优化试验结果表明,诃子:黄连=2:1为最佳剂量比。其对奶牛子宫内膜炎的临床分离株抑菌效果与标准菌株一致。说明该优化组合方对奶牛子宫内膜炎病原菌具有良好抑菌作用。2.郁金散优化组合方对巨噬细胞炎症因子分泌的影响:通过构建细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞的体外炎症模型,研究了郁金散优化组合方对小鼠腹腔巨噬细胞的毒力学评价、对巨噬细胞增殖的作用和对巨噬细胞吞噬功能的影响,以及不同浓度中药组方对一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。结果表明,郁金散优化组合方在156.3~312.5μg/mL浓度范围内对小鼠腹腔巨噬细胞无明显毒性作用,在9.4~150.0μg/mL浓度范围内能促进小鼠腹腔巨噬细胞增殖和促进巨噬细胞吞噬作用。通过检测该组方对小鼠腹腔巨噬细胞分泌促炎症细胞因子的抑制作用得出在9.4~150.0μg/mL的剂量范围内该组方具有明显抑制TNF-α、IL-6、NO和NOS等促炎症细胞因子的作用,且具有一定剂量依赖性。郁金散优化组合方的体内抗炎试验:通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀和甲醛致小鼠足跖肿胀试验法进行郁金散优化组合方的体内抗炎效果研究。结果表明,郁金散优化组合方的中、高浓度组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀抑制率与地塞米松相当,且中、高浓度组间差异不显著(P>0.05),而中浓度组显著优于低浓度组(P<0.05),表明其中浓度时对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀即有较好抑制作用;郁金散优化组合方的中、高浓度组对甲醛所致的足跖肿胀抑制作用与地塞米松组相当(P>0.05),且高浓度组显著优于低浓度组(P<0.05),中浓度与低浓度比较差异不显著(P>0.05),表明其高浓度时对甲醛所致的足跖肿胀有较好抑制作用。
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