论文部分内容阅读
目的：通过高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)模型,探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)对大鼠NAFLD的治疗作用及可能机制。方法：52只雄性SD大鼠适应性饲养1w后随机分为(1)、单纯性脂肪肝：对照组8只,普通饲料饲养,第8w末继续普通饲料饲养并生理盐水0.3ml/day腹腔注射；模型组10只,高脂饲料饲养；治疗组8只,高脂饲料饲养；第8w末杀死2只模型组大鼠证明单纯性脂肪肝模型建立,然后模型组停止高脂饲料饲养并生理盐水0.3ml/day腹腔注射,治疗组第8w末停止高脂饲养并PDTC 100mg/kg/day腹腔注射,于第12w末处死所有大鼠；(2)、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis, NASH):对照组8只,普通饲料饲养,第12w末继续普通饲料饲养并生理盐水0.3ml/day腹腔注射；模型组10只,高脂饲料饲养；治疗组8只,高脂饲料饲养；第12w末杀死2只模型组大鼠证明NASH模型建立,然后模型组停止高脂饲料饲养并生理盐水0.3ml/day腹腔注射,治疗组第12w末停止高脂饲养并PDTC 100mg/kg/day腹腔注射,于第16w末处死所有大鼠；检测血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein, HDL)、空腹血糖(fasting blood glucose, FBS)、空腹胰岛素(fasting insμlin, Fins),计算出肝指数、空腹胰岛素抵抗指数(fasting insμlin resistance index, FIRI), HE染色、油红O染色、Masson染色观察肝组织病理学变化,免疫组化测肝组织中NF-κB p65的表达水平,RT-PCR测肝组织中肿瘤坏死因子-alpha (TNF-a)mRNA、IL-6 mRNA、过氧化物酶体增殖物激活受体a(peroxisome proliferator activated receptor alpha, PPARa)mRNA等指标。结果：HE染色示成功构建了单纯性脂肪肝、NASH模型；单纯性脂肪肝、NASH模型组与同期对照组比较,肝指数、ALT、AST、TG、TC、FIRI均增加,HDL则减少(p＜0.05或p<0.01)；治疗组与同期模型组比较,肝指数、ALT、AST、TG、TC、FIRI均有所改善,HDL则增加(p＜0.05或p＜0.01);HE染色、油红O染色、Masson染色均示肝脏病理学改变较模型组好转(p＜0.05)；免疫组化示NF-κB p65在胞核中表达较模型组下降(p<0.05);RT-PCR示TNF-αmRNA、IL-6 mRNA均较模型组表达下降,PPARa mRNA均较模型组升高(p<0.05)；两模型组间、两治疗组间肝指数、ALT、AST、TG、TC、FIRI、HDL、肝细胞脂肪变性程度、炎症活动度、脂滴沉着面积、纤维组织面积、NF-κB p65、TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、PPARαmRNA均有统计学差异(p＜0.05)。结论：1.续8w的高脂饲料饲养成功构建了SD大鼠单纯性脂肪肝模型。2.持续12w的高脂饲料饲养成功构建了SD大鼠NASH模型。3. PDTC能改善IR、肝功能,降低血脂,可能对大鼠NAFLD有治疗作用。4. PDTC具有减轻体重、改善机体脂质代谢紊乱、抗炎等作用,同时可抑制NF-κB进入胞核,其机制可能与PDTC抑制NF-κB进入胞核,降低TNF-αmRNA、IL-6 mRNA表达、增加PPARαmRNA表达有关。5. PDTC有可能成为一种新的安全有效的治疗NAFLD的药物。