【摘 要】
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背景:多项研究揭示了 lncRNAs在多囊卵巢综合征(PCOS)中的功能作用,并探索了其在PCOS发生发展过程中相关的分子和通路调控机制。之前的研究表明,LINC00477在PCOS患者中异常上调,然而其机制尚不明确。目的:研究LINC00477在PCOS患者血清及PCOS动物模型中的表达情况。在细胞水平上探究LINC00477表达变化对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。最后,探究LINC00477
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背景:多项研究揭示了 lncRNAs在多囊卵巢综合征(PCOS)中的功能作用,并探索了其在PCOS发生发展过程中相关的分子和通路调控机制。之前的研究表明,LINC00477在PCOS患者中异常上调,然而其机制尚不明确。目的:研究LINC00477在PCOS患者血清及PCOS动物模型中的表达情况。在细胞水平上探究LINC00477表达变化对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响。最后,探究LINC00477/miR-128/SOCS6轴调控PCOS发生发展的作用机制。方法:选取2019年1月到4月PCOS患者及健康对照者,收集患者外周血,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测样本中LINC00477表达水平。原位杂交实验和qRT-PCR法检测PCOS鼠与正常鼠的卵巢及血清LINC00477表达。再选择卵巢颗粒细胞进行转染,细胞分为空白对照组,LINC00477过表达组,LINC00477敲低组,阴性对照组。随后采用MTT法及流式细胞术分别检测LINC00477表达变化对人卵巢颗粒细胞活力以及凋亡的影响。qRT-PCR法检测miR-128在PCOS患者组和健康对照组血清样本表达,并分析LINC00477与miR-128二者表达的相关性。qRT-PCR检测PCOS鼠与正常鼠卵巢或血清中miR-128表达。生信分析预测LINC00477与miR-128结合,双荧光素酶报告实验验证二者的结合程度。接着,将卵巢颗粒细胞分为空白对照组,LINC00477过表达组,LINC00477过表达+miR-NC组,LINC00477过表达+miR-128组,采用上述功能试验检测细胞增殖和凋亡水平。通过生物信息方法,预测SOCS6为miR-128的靶基因,qRT-PCR法检测SOCS6在PCOS患者组和健康对照者血清样本表达,并分析SOCS6与miR-128二者表达的相关性。qRT-PCR检测PCOS鼠与正常鼠卵巢及血清中SOCS6表达。双荧光素酶报告实验验证二者的结合程度。拯救实验中,细胞共分miR-128过表达组,miR-NC组,miR-128 mimics+SOCS6组,采用上述功能试验检测细胞增殖和凋亡水平。结果:在PCOS患者血清中,LINC00477水平显著提高。LINC00477在PCOS小鼠卵巢和血清中均高于正常组小鼠。在卵巢颗粒细胞中,过表达LINC00477后,显著抑制细胞增殖并促进凋亡。相反,敲除LINC00477后,增殖能力促进,凋亡能力抑制。miR-128表达在患者血清里显著减少。从PCOS小鼠模型的卵巢和血清样本也发现miR-128的低表达。机制实验验证了 LINC00477与miR-128的靶向结合。miR-128过表达消除了 LINC00477高表达对卵巢颗粒细胞增殖以及凋亡影响。SOCS6在PCOS患者血清里显著升高。同时PCOS小鼠模型卵巢和血清样本SOCS6高表达。机制实验验证了 SOCS6与miR-128的靶向结合。SOCS6过表达消除了 miR-128高表达对卵巢颗粒细胞增殖以及凋亡影响。结论:1、LINC00477在PCOS患者血清、PCOS小鼠模型卵巢组织和血清表达明显上调;抑制卵巢颗粒细胞活力、增殖,促进凋亡。2、miR-128在PCOS患者血清、PCOS小鼠模型卵巢组织和血清表达明显下调,与LINC00477表达呈负相关。卵巢颗粒细胞中LINC00477通过负调控miR-128,影响细胞活力、增殖和凋亡。3、SOCS6在PCOS患者血清、PCOS小鼠模型卵巢组织和血清表达明显上调,与miR-128表达呈负相关。卵巢颗粒细胞中miR-128通过负调控SOCS6细胞活力、增殖和凋亡。4、LINC00477/miR-128/SOCS6参与卵巢颗粒细胞增殖与凋亡的调控,在PCOS发生中具有重要的作用。
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