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测定中药华蟾素注射剂(cinobufacine Injection，Cino)对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株(MCF-7／ADM)的无细胞毒性浓度，并检测此剂量能否逆转MCF-7／ADM株细胞对化疗药物阿霉素(adriamycin，ADM)的耐药性及其可能的机制。
方法:
体外培养人乳腺癌细胞阿霉素敏感株(MCF-7／S)和阿霉素耐药株(MCF-7／ADM)，先采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Cino对MCF-7／s,nMCF-7／ADM两株细胞有无细胞毒性作用并确定其无细胞毒性浓度；MCF-7／ADM株细胞对ADM的耐药倍数：无细胞毒浓度的Cino对MCF-7／ADM株细胞的逆转倍数及其对MCF-7／ADM株细胞生长曲线及倍增时间的影响。再用高效液相色谱(HPLC)法检测加无细胞毒浓度Cino前后MCF-7／S和MCF-7／ADM两株细胞内阿霉素(ADM)的浓度变化。
结果:
1.MTT比色法结果显示：Cino可明显抑制体外培养的MCF-7／s株和HMCF-7／ADM株细胞的增殖，且抑制程度随Cino作用时间和浓度的增加而增加。表明Cino本身有细胞毒性作用，能抑制MCF-7两株细胞的增殖，MCF-7／ADM细胞对Cino仍然敏感；低于15μg／ml的Cino对MCF-7／s和MCF-7／ADM两株细胞均无显著毒性作用(IR<10％)，该浓度的Cino与ADM合用时，能显著降ADM对MCF-7／ADM细胞的IC<,50>强ADM对MCF-7／ADM株细胞的杀伤作用，即与ADM合用时，能恢复ADM对MCF-7／ADM细胞的增殖抑制作用，ADM与Cino协同作用合用的CI值小于1，表明Cino具有化疗增敏作用，与细胞计数绘制生长曲线结果相一致。2.高效液相色谱法结果显示：无细胞毒浓度(15μg／ml)Cino与5μg／mlADM合用后，能显著增加MCF-7／ADM株细胞内ADM的积累，而未见显著增加MCF-7／S株细胞内ADM的积累，表明Cino可能通过某种机制而减少药物的外排。
结论:
1.MCF-7／s株和MCF-7／ADM株两细胞的生长抑制率均明显随Cino浓度及作用时间的增加而增加，呈药物浓度一时间依赖方式。表明Cin0本身对MCF-7两株细胞有增殖抑制作用，MCF-7／ADM株细胞对Cino未产生耐药性。
2.无细胞毒浓度的Cino能明显增强ADM对人乳腺癌细胞耐药株MCF-7／ADM的化疗增敏作用，表明Cino对MCF-7／ADM细胞的MDR有部分逆转作用。
3.无细胞毒浓度的Cino能明显加MCF-7／ADM细胞内ADM的含量，表明其逆转MDR的作用，可能与其通过某种机制而减少药物的外排有关。是否因为其下调了Pgp的表达，减少细胞内药物外排而逆转MDR，有待进一步研究。