【摘 要】
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目的:通过靶标代谢组学方法研究健康,肝炎（HBV-I）、肝癌（HCC）患者及二乙基亚硝铵（DEN）诱导大鼠血清和肝组织中嘌呤类代谢物的变化,探讨尿酸代谢与HCC发生发展的机制。方法:1.建立和确证在生物样品中同时测定9种嘌呤代谢物的UPLC-HILIC-QTOF-MS/MS分析方法。以Logistic回归联合ROC曲线分析筛选肝癌诊断生物标志物.2.以DEN腹腔注射SD大鼠,诱导大鼠肝癌模型,模拟
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目的:通过靶标代谢组学方法研究健康,肝炎（HBV-I）、肝癌（HCC）患者及二乙基亚硝铵（DEN）诱导大鼠血清和肝组织中嘌呤类代谢物的变化,探讨尿酸代谢与HCC发生发展的机制。方法:1.建立和确证在生物样品中同时测定9种嘌呤代谢物的UPLC-HILIC-QTOF-MS/MS分析方法。以Logistic回归联合ROC曲线分析筛选肝癌诊断生物标志物.2.以DEN腹腔注射SD大鼠,诱导大鼠肝癌模型,模拟人体肝癌形成过程。DEN诱导2周（炎症期）及14周（癌症期）后分别取血清（包括肝组织）测定嘌呤类代谢物含量。3.黄嘌呤氧化酶抑制剂非布索坦干预对DEN诱导大鼠肝癌模型的影响,探讨嘌呤代谢异常与肝癌发生相关的可能机制。结果:1.结果表明建立的检测9种嘌呤化合物的方法在一定的浓度范围内线性关系良好,精密度、准确度等均满足临床分析要求。人体血清样品分析显示:正常组和HCC两组比较,在HCC中黄嘌呤（+91.9%）,肌苷（+29.7%）和腺嘌呤核苷（+132.3%）显著性上调外,次黄嘌呤（-82.8%）和腺嘌呤（-65.2%）显著性下调;HBV-I和HCC两组比较发现:相对于HBV-I,HCC血清中次黄嘌呤（-88.7%）及黄嘌呤核苷（-72.5%）,腺嘌呤（-79.9%）及腺嘌呤核苷（-37.5%）,鸟嘌呤（-27.2%）及鸟嘌呤核苷（-90.6%）明显下降,而黄嘌呤（+47.6%）和肌苷（+57.6%）显著性上调。以腺嘌呤和鸟嘌呤核苷2个指标联合建立Logistic模型,鉴别诊断正常组和HCC的ROC曲线下面积为1.000,灵敏度和特异性均为100%;以次黄嘌呤和鸟嘌呤核苷2个指标联合,鉴别诊断HBV和HCC,其ROC曲线下面为1.0,敏感度和特异性也均为100%。我们结果显示嘌呤代谢物含量的变化可能与肝癌的发生发展紧密相关。2.与正常对照组相比,DEN大鼠14周血清中肌苷（-17.6%）、尿酸/黄嘌呤（-81.9%）显著性下调,其中黄嘌呤（+137.3%）显著性上调且与人体血清变化一致;正常对照组肝组织相比,大鼠给药DEN 2周后黄嘌呤（-18.4%）显著性下调,次黄嘌呤（-27.5%）、腺嘌呤（-27.4%）、黄嘌呤核苷（-9.7%）、鸟嘌呤核苷（-10.7%）、腺嘌呤核苷（-34.8%）等显著性下调,尿酸（+42.2%）略微上调;而且14周后肝组织中黄嘌呤（-18.9%）、黄嘌呤核苷（-23.6%）、鸟嘌呤核苷（-27.1%）、腺嘌呤核苷（-43.6%）持续显著性下调,尿酸（+64.1%）持续显著性上调,尿酸/黄嘌呤（+106.8%）,尿酸/次黄嘌呤（+124.9%）显著性上调。和正常组相比,DEN组14周血清和肝组织XOD活性明显上升。表明尿酸生成的增加可能促进肝癌的发生发展。3.与正常对照组相比,DEN诱导大鼠给予非布索坦干预后血清样本中AFP和氨基酸比值均下调,且氨基酸比值在血清和组织中均有回归正常对照组趋势。MDA在DEN组血清和组织样本中均上调,在DEN+Febu组均下调且有回归正常对照组趋势,表明抑制尿酸的生成有助于延缓肝癌的进展,其机制可能与氧化应激有关。结论:本学位论文发现HBV-I和HCC患者血清中嘌呤类代谢物含量变化明显,提示嘌呤谢物含量的变化可能与肝癌的发生发展相关。我们结果表明DEN诱导HCC大鼠嘌呤代谢加快,而口服黄嘌呤氧化酶抑制剂后延缓肝癌的进展,表明尿酸合成的增加可能是导致肝癌的发生发展的因素之一。本学位论文研究结果有助于从代谢水平揭示肝癌发生发展与代谢异常的关系,具有重要的科学意义和较高的研究价值。
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