【摘 要】
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目的: 利用修饰的单链寡核苷酸(MSO)与低密度脂蛋白受体(LDLR)基因错配,模拟DNA损伤以触发ERCC6启动TCR偶联的LDLR基因修复。 方法: 将虫萤光素酶(luc)基因融合在无
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目的: 利用修饰的单链寡核苷酸(MSO)与低密度脂蛋白受体(LDLR)基因错配,模拟DNA损伤以触发ERCC6启动TCR偶联的LDLR基因修复。 方法: 将虫萤光素酶(luc)基因融合在无义突变的LDLR基因(LDLR-luc)3’端构建真核表达载体,转染细胞制备LDLR无义突变的细胞模型。进而转染可在LDLR点突变处上下碱基产生1个或6个错配的MSO,形成该部位的DNA错配/损伤,并同时转染ERCC6真核表达质粒,提高细胞ERCC6蛋白的表达。通过测量luc活性,比较各组间是否有差异。通过基因测序,确定其DNA是否被改变为与转染的MSO相同的基因序列。 结果: 具有6个错配的MSO组与仅有1个错配的MSO组比较,其luc活性显著升高,表明其基因修复效率更高。另外,提高ERCC6的表达,基因修复效率提高了近20倍。通过酶切鉴定和基因测序,表明被修复的基因片段与MSO的基因序列相同。 结论: 利用MSO与LDLR基因错配,可触发ERCC6启动TCR偶联的LDLR基因修复,具有6个错配的MSO较仅有1个错配的MSO具有更高的基因修复效率。
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