研究背景　　 淋巴瘤起源于淋巴结和淋巴组织，其发生大多与免疫应答过程中淋巴细胞增殖分化产生的某种免疫细胞恶变有关，是免疫系统的恶性肿瘤。按组织病理学改变，淋巴瘤可分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkinlymphoma，HL)和非霍奇金淋巴瘤(nonHodgkinlymphoma，NHL)。非霍奇金淋巴瘤是血液系统常见恶性肿瘤之一，其病死率高，传统化疗副作用大，患者多不能长期坚持，且复发率高；造血干细胞移植费用较高，资源有限，限制了其在临床的广泛应用。因此新型的低副作用的抗肿瘤药日渐受到人们关注。　　 热休克蛋白(HSPs)是早在1962年就被发现的一种高度保守的蛋白，不同情况的应激均能诱导它。随后人们又发现HSPs可以作为其他细胞内蛋白质的分子伴侣，对后者有很好的保护作用。在HSP家族中最重要、诱导后表达量最大的是HSP70家族，为广泛分布在细胞的亚细胞结构中的可溶性蛋白。HSP70通过与其客户蛋白质的结合或减弱或增强蛋白质活性，以应付外界压力。HSP70在正常细胞中不表达或表达量很低，但在肿瘤细胞中高表达。大量实验表明，热休克蛋白能通过其分子伴侣功能，影响肿瘤细胞中的细胞周期蛋白，激酶等的活性，从而影响到肿瘤细胞的生长，表现为抗凋亡的作用。　　 通过影响HSP70而达到抗肿瘤的作用已成为人们关注的焦点。AliAghdassi等研究HSP70在胰腺癌中的作用证实HSP70在胰腺癌中较正常细胞中高表达且其高表达阻碍了肿瘤细胞的凋亡，并发现选择性下调HSP70的表达能诱导胰腺癌细胞的凋亡并能减轻小鼠移植瘤的大小及重量，同时发现在下调HSP70的过程中伴随着凋亡信号分子caspase-3和caspase-9的激活，认为此机制是HSP70抑制剂的抗肿瘤作用机制之一。　　 白藜芦醇是从多种葡萄属植物中提取的多酚类化合物，具有抗炎，抗菌，抗肿瘤等作用。白藜芦醇作为一种化学预防剂及心脏保护制剂日渐受到人们关注，也有人认为其可以直接作为抗肿瘤药物。Clement等早在1998年就发现一定剂量的白藜芦醇可以诱导HL-60细胞发生凋亡。PrabirK等最近发现白藜芦醇能通过抑制HSP70的表达诱导K562细胞凋亡，并能增加17-AAG对K562细胞的抗肿瘤作用，实验发现白藜芦醇能降低细胞核内HSF1的水平而升高胞浆内HSF1的水平，这阻止了HSF1的核定位，从而从基因水平下调HSP70的表达，这可能是白藜芦醇抗肿瘤或增敏的主要机制。　　 白藜芦醇对非霍奇金淋巴瘤的作用国内外尚无报道，本实验旨在研究白藜芦醇对非霍奇金淋巴瘤细胞raji细胞系是否具有抗肿瘤作用，并初步探讨其抗肿瘤的作用是否因为下调HSP70的表达所致，为进一步阐明白藜芦醇抗淋巴瘤的作用机制提供依据。因此本实验研究分以下两部分：　　 1.白藜芦醇对非霍奇金淋巴瘤细胞系raji细胞增殖及凋亡的影响。　　 2.HSP70在raji细胞中的表达情况及白藜芦醇对raji细胞中HSP70表达的影响。　　 第一章：白藜芦醇对raji细胞增殖及凋亡的影响研究　　 目的：　　 研究白藜芦醇对淋巴瘤raji细胞增殖及凋亡的影响。　　 材料与方法：　　 1.细胞培养与分组：raii细胞培养于含10％的胎牛血清的RPMI-1640培养基。　　 2.CCK8法检测细胞活性：收集对数生长期细胞，用CCK-8法检测细胞活性。　　 3.流式细胞仪检测细胞凋亡比例及分析细胞周期分布：收集待检测细胞，用FACS流式细胞仪进行双色荧光细胞流式计数，观察凋亡细胞百分比；收集待检测细胞，用流式细胞仪分析细胞周期分布。　　 结果：　　 白藜芦醇能明显抑制淋巴瘤raii细胞的增殖，作用呈现浓度及时间依赖性，其机制可能是影响了细胞周期，造成细胞周期阻滞；白藜芦醇能明显诱导淋巴瘤raji细胞的凋亡，作用呈现浓度及时间依赖性，差异均有统计学意义。　　 结论：白藜芦醇能浓度及时间依赖性的抑制淋巴瘤raji细胞的增殖及诱导其凋亡，其抑制增殖的机制可能是白藜芦醇导致了细胞周期阻滞。　　 第二章：HSP70在raji细胞中的表达情况及白藜芦醇对其表达的影响研究　　 目的：　　 研究raii细胞与正常人外周血单个核细胞中HSP70表达的差异；检测白藜芦醇处理raji细胞后HSP70表达的情况。　　 材料与方法：　　 1.细胞培养与分组：raji细胞培养于含有10％的胎牛血清的RPMI-1640培养基。3例健康献血员外周静脉血用密度梯度离心法分离得单个核细胞为正常对照组。　　 raji细胞先分五组：白藜芦醇0、40、100、160、250μmol/L处理raji细胞；后取白藜芦醇100μmol/L处理raji细胞后分0h、24h、48h、72h分别用于Westernblot及RT-PCR检测；　　 2.Westernblot检测：　　 2.1检测肿瘤细胞raji细胞与3份正常外周血淋巴细胞的HSP70的蛋白相对表达水平。　　 2.2白藜芦醇0、40、100、160、250μmol/L处理raji细胞后48h用Westernblot检测raji细胞中HSP70的表达情况。　　 2.3白藜芦醇100μmol/L处理raji细胞后分0h、24h、48h、72h，用Westernblot检测HSP70的表达情况。　　 3.RT-PCR检测：白藜芦醇100μmol/L处理raji细胞后分0h、24h、48h、72h，用RT-PCR检测HSP70mRNA的表达情况。　　 结果：　　 淋巴瘤raji细胞的HSP70相对定量(HSP70/GAPDH)在三次重复实验均明显高于正常对照组，且差异具有统计学意义；白藜芦醇能浓度及时间依赖性的下调HSP70蛋白的表达，且差异具有统计学意义；白藜芦醇能时间依赖性的下调HSP70mRNA的表达，且差异具有统计学意义。　　 结论：　　 raji细胞存在HSP70的高表达，白藜芦醇从蛋白及基因水平均证实能下调HSP70的表达。