一、研究背景目前,肺癌是发病率和死亡率都位居前列的恶性肿瘤之一。其中非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）占肺癌的80-85%,成为严重威胁我国以及全世界人民身体健康和生命安全的主要原因之一。对于非小细胞肺癌,虽然放疗、化疗、靶向治疗、免疫治疗均取得了很大进步,但是这些治疗方法均存在耐药问题,而有研究显示肿瘤相关巨噬细胞是导致耐药的机制之一。我们通过前期的生物信息学分析,发现肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤微环境中主要的免疫细胞,与非小细胞肺癌的不良预后相关。而进一步的分析发现LAMC2与巨噬细胞的浸润程度相关。LAMC2是异三聚体糖蛋白Laminin-332的γ2亚基。有越来越多的证据表明LAMC2单体在癌症中起病理作用。然而,在NSCLC中,LAMC2与巨噬细胞浸润的相关性未见报道。因此,我们对它进行了一些研究。二、研究方法首先应用生物信息学分析方法,以癌症基因组图谱（TCGA）数据为基础,评价肿瘤微环境的变化,筛选出非小细胞肺癌组织中的差异免疫细胞。结果发现肿瘤相关巨噬细胞与非小细胞肺癌的预后最相关。然后利用癌症基因组图谱进行差异表达基因（DEGs）分析,筛选巨噬细胞浸润高低两组的差异表达基因,发现前50个差异基因中LAMC2与非小细胞肺癌的预后关系最密切。随后我们检测了非小细胞肺癌的LAMC2基因及蛋白的表达水平。并进行了 LAMC2下调后的非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭等功能实验。免疫组织化学分析非小细胞肺癌组织中LAMC2表达与巨噬细胞浸润之间的相关性。Transwell共培养的方法观察非小细胞肺癌肿瘤细胞LAMC2下调后对THP-1细胞迁移的影响,并观察了含重组LAMC2蛋白的条件培养基对THP-1细胞迁移的影响。THP-1与LAMC2基因敲低组或阴性对照组的H1975共培养后,THP-1细胞送基因测序,找出不同组别的差异基因,并进行GO富集分析和KEGG通路富集分析,初步探讨LAMC2对巨噬细胞的作用机制。最后通过体内动物实验验证LAMC2蛋白对巨噬细胞迁移的影响。三、研究结果与早期相比,中晚期非小细胞肺癌的免疫评分更低。生物信息学分析结果显示巨噬细胞与非小细胞肺癌的不良预后相关。LAMC2与巨噬细胞的浸润程度呈正相关,并且与非小细胞肺癌的不良预后呈正相关。LAMC2在非小细胞肺癌的细胞株及肿瘤组织中均高表达。LAMC2基因下调后非小细胞肺癌肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力均有下降。免疫组化结果显示非小细胞肺癌组织中LAMC2与巨噬细胞标志CD68的表达呈正相关。非小细胞肺癌细胞系LAMC2的表达下调后与THP-1共培养可减少THP-1的迁移,含有LAMC2蛋白的条件培养基可以促进THP-1的迁移。我们分析与H1975共培养后THP-1细胞的RNA测序结果,考虑LAMC2可能通过与整合素β1结合,激活PI3K-AKT信号通路,诱导巨噬细胞的浸润。体内动物实验显示LAMC2蛋白可趋化巨噬细胞的聚集。四、结论我们的研究表明,巨噬细胞是非小细胞肺癌的不良预后因素。LAMC2不但对非小细胞肺癌肿瘤细胞本身有促进作用,而且可以导致肿瘤相关巨噬细胞浸润,从而形成肿瘤免疫抑制性微环境,促进肿瘤的进展。因此,LAMC2有可能成为非小细胞肺癌调节肿瘤微环境的潜在的治疗靶点。