【摘 要】
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矮牵牛（Petunia hybrida Vilm.）因其花型美丽花色丰富具有良好的观赏价值,同时也是花发育研究的模式植物之一。PhMYC2作为与矮牵牛雄蕊育性密切相关的PhGRP基因直接上游的转录因子,二者在花药中的表达密切相关。MYC2是JA信号途径的关键基因,其广泛的功能及多样的调控机制一直是研究的热点,但是植物花药发育中对于MYC2的研究较少,在拟南芥花药发育中MYC2的上游基因未见报道。为
【基金项目】
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中央高校基本科研业务费专项基金（2662017PY075、2662016PY042、2013PY085）； 湖北省自然科学项目基金（2014CFB926）；
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矮牵牛（Petunia hybrida Vilm.）因其花型美丽花色丰富具有良好的观赏价值,同时也是花发育研究的模式植物之一。PhMYC2作为与矮牵牛雄蕊育性密切相关的PhGRP基因直接上游的转录因子,二者在花药中的表达密切相关。MYC2是JA信号途径的关键基因,其广泛的功能及多样的调控机制一直是研究的热点,但是植物花药发育中对于MYC2的研究较少,在拟南芥花药发育中MYC2的上游基因未见报道。为了进一步探索PhMYC2在雄蕊发育的调控机制,我们对PhMYC2上游的调控因子进行了初步的挖掘。研究结果如下:（1）PhMYC2转录因子的亚细胞定位分析。成功构建PhMYC2融合GFP的超表达载体并瞬时转化到本氏烟草中,在激光共聚焦显微镜下观察,结果表明PhMYC2基因定位在细胞核中以及细胞质膜上。（2）PhMYC2启动子的克隆及分析。以矮牵牛基因组数据库为参照,从‘幻想’矮牵牛中成功扩增得到PhMYC2基因上游2347bp片段作为启动子。通过生物信息学分析发现启动子上包含多个激素、光照、温度响应的元件。进一步构建了包含PhMYC2启动子片段的酵母单杂交诱饵载体。（3）酵母单杂交文库的筛选。我们提取了矮牵牛0.2cm、0.3cm、0.5cm、1.0cm、1.5cm时期花芽中的花药RNA,以此为模板构建了矮牵牛花药发育早期c DNA文库。通过酵母单杂交技术利用诱饵载体对文库进行了筛选并得到了五个候选基因PhAHL20、PhSPL12、PhZAT10、PhZPT2-9及PhMYC2。（4）候选基因的验证与初步分析。首先对候选基因进行生物信息学的初步分析;其次,通过体外酵母单杂交及体内双荧光素酶试验进行结合验证,结果表明PhZAT10和PhMYC2在体内外均能与pPhMYC2结合,而PhSPL12、PhZPT2-9能够在体内与pPhMYC2结合,PhAHL20仅在体外试验中与pPhMYC2结合;最后利用q RT-PCR对这四个基因在矮牵牛中的时空表达模式进行了分析。
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