酶解中国毛虾蛋白制备血管紧张素转换酶抑制肽的研究

来源 :湛江海洋大学 广东海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:inasy
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本研究的主要探讨以高产低值的中国毛虾为原料,经酶解、分离提取制备具体外活性的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽。对中国毛虾的营养成分进行了研究,结果表明中国毛虾是一种高蛋白、低糖、低脂肪的海产品。其蛋白质的氨基酸组成中,呈味氨基酸如天门冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、脯氮酸、丝氨酸总含量约占氨基酸总量的46.7%,适合制作海鲜调味料;与降血压肽密切相关的色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异壳氨酸、脯氨酸含量也较高。建立了ACE抑制肽活性的体外测定方案,从猪肺中成功提取了ACE粗酶,采用快速而简便的比色法测定其活力浓度为0.18U/ml。将所提取的猪肺ACE粗酶用于酶解液抑制活性的体外测定,并以此为指标从6种蛋白酶中筛选出胃蛋白酶作为最佳用酶,同时通过正交实验对其酶解条件进行了优化设计,胃蛋白酶在pH2.4、酶解时间3小时、酶量3%、底物浓度8%的最佳酶解条件下酶解中国毛虾所得酶解液的ACE抑制活性最高,IC<,50>为0.65mg/ml利用风味酶和活性炭对酶解液进行了处理。结果表明,经风味酶和活性炭处理后酶解液的抑制活性降低,经分析认为是一部分具有ACE抑制活性的苦味肽被降解或吸附。抽滤后的酶解液经Sephadex G-25(68cmx1.6cm)和Sephadex G-15(72cm x 1.6cm)凝胶色谱层析,后获得高活性划分的IC<,50>分,别为0.084 mg/ml和0.046mg/ml。比较测定了原料蛋白质、S ephadex G-25和Sephadex G-15层析组分的氨基酸组成,发现,在原料蛋白质,Sephadex G-25以及Sephadex G-15收集组分中芳香族氨基酸(色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸)及脯氨酸的含量分别为13.29%,9.43%和8.95%,分离提取前后有所下降;而疏水性氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸)含量分别为l7.69%,18.45%和20.12%,呈上升的趋势。Asp、Glu、Arg、Pro、Ile和Lys在原料蛋白质及Sephadex G-25和G-15组分中含量分别高达51.73%,56.34%和56.14%。另经飞行时间质谱仪测定Sephadex G-15凝胶层析高活性组分的分子量主要分布在700-1900之间。
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