对虾素和防御素在毕赤酵母中的重组表达和性质分析

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抗菌肽是多种生物先天免疫的重要组成部分,是宿主防御病原微生物入侵的重要分子屏障.抗菌肽具有分子量低、水溶性好、热稳定、强碱性和广谱抗菌等特点,能快速有效的杀死微生物,而对哺乳动物细胞无毒性或低毒性.它们对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌,真菌,甚至某些带被膜的病毒和原生动物都有一定的作用.除了抗菌活性以外,抗菌肽还有抗肿瘤活性、促细胞分裂活性和信号分子的作用.抗菌肽研究愈来愈受到重视,已深入到分子结构、表达调控、作用机制以及临床应用等多个方面.采用与Chp相同的实验方案我们还构建了Mdde/pPIC9K/KM71,诱导表达后同样也进行了Western-blot、N-端测序、表达产物纯化、抗菌谱和最小抑菌浓度的测定等一系列实验,结果显示,我们成功表达了家蝇防御素rMDDE,分子量与预期相一致,能够被用原核表达的家蝇防御素所制备的兔抗血清所识别,N-端序列也与预期的一致.诱导表达上清液中蛋白含量为275mg/L,CM-Sepharose CL-6B纯化得率为48﹪.抑菌实验表明家蝇防御素同样显示出对革兰氏阳性菌和阴性菌的抑制活性.
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