【摘 要】
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禽流感病毒广泛存在于各种禽类中,可感染多种禽类和哺乳动物,并引起严重呼吸道疾病。H5、H7、H9和H10等亚型禽流感病毒可以跨种间传播,感染人类并造成大量死亡病例,已经引起了全球广泛关注。因此,建立禽流感病毒快速检测方法对于疾病有效防控具有重要意义。在前期成功制备了H7亚型禽流感病毒快速检测方法的基础上,本研究针对H5、H9和H10亚型禽流感病毒,利用单克隆抗体建立了免疫学快速检测方法,并进行了初
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禽流感病毒广泛存在于各种禽类中,可感染多种禽类和哺乳动物,并引起严重呼吸道疾病。H5、H7、H9和H10等亚型禽流感病毒可以跨种间传播,感染人类并造成大量死亡病例,已经引起了全球广泛关注。因此,建立禽流感病毒快速检测方法对于疾病有效防控具有重要意义。在前期成功制备了H7亚型禽流感病毒快速检测方法的基础上,本研究针对H5、H9和H10亚型禽流感病毒,利用单克隆抗体建立了免疫学快速检测方法,并进行了初步应用研究。首先,制备H5、H9和H10亚型禽流感病毒血凝素（HA）蛋白单克隆抗体。分别以H5、H9和H10亚型HA蛋白分别免疫BALB/c小鼠,并且通过酶联免疫吸附反应（ELISA）进行筛选,分别获得6株、5株和2株单克隆抗体。其次,通过ELISA方法分析了单克隆抗体的亲和力,这些单克隆抗体与对应抗原的亲和力好,处于15.63ng/m L-62.5ng/m L之间。基于抗体特性和配对实验筛选出配对抗体,分别制备了H5、H9和H10亚型禽流感病毒的检测胶体金免疫层析试纸条和ELISA试剂盒,并对其特异性和灵敏度进行了分析。其中,胶体金免疫层析方法检测H5N6、H9N2和H10N7病毒代表株的灵敏度分别为1、4和1血凝单位（HAU）/100u L;ELISA方法检测上述病毒的灵敏度则为0.5、4和0.5HAU/100u L。此外,以上两种方法均不与其他病原发生反应,具有良好特异性。最后,通过对200份家禽粪便进行了临床样本检测,评价H5、H9和H10的胶体金试纸和ELISA方法实际应用价值,结果表明,这两种方法均具有良好的灵敏度和特异性。综上所述,本研究得到以下结论:（1）本研究获得了多株H5、H9和H10亚型禽流感病毒HA蛋白的单克隆抗体,并且具有较好特异性和亲和力。（2）利用这些特异性单克隆抗体建立了检测H5、H9和H10亚型禽流感病毒的胶体金免疫层析试纸条和ELISA试剂盒,为禽流感疫情有效防控提供了技术支持。
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