动物原始生殖细胞(Primordial germ cell，PGC)是研究胚胎早期发育机理及相关调控的理想模型，对其研究已然成为现代生命科学领域最具活力、最为热门和前沿的课题之一。动物原始生殖细胞因其无限增殖、多向分化的能力和遗传可操作性成为细胞研究乃至基因治疗的理想载体。本研究以14-18d胎兔为试验对象，体外分离、培养、扩增PGCs，观察PGCs的形态变化及集落形成的过程，用AKP染色及分子生物学等方法鉴定兔PGCs，并探索饲养层种类、血清含量、细胞因子等因素对兔PGCs分离培养的影响，这也为下一步的建系工作做出了铺垫。　　1.本试验选取昆明白近交系小鼠13-15d胎龄胎鼠和日本大耳白兔18-21d胎龄胎兔，体外分离培养其胚胎成纤维细胞，对不同代细胞冻存不同时间后进行复苏并计算复苏率、制作生长曲线。得出以下结论:①小鼠、兔的P3代胚胎成纤维细胞生长活性优良，结构形态、生理功能稳定，且传至P3代的细胞被纯化，更适合作为备用细胞使用;②经短时间(30d、60d)冻存的P1、P3代MEF和REF复苏后其生长性能并没有大幅度下降，而P3代相较P1来说细胞更纯，因此可选用P3代MEF、REF短时间冻存，以便于后续试验的需要。　　2.本试验选用的是日本大耳白兔14-18d胎龄胎兔，无菌剥离生殖嵴，体外分离培养PGCs，并采用酶组织化学检测碱性磷酸酶活性、RT-PCR检测转录因子Oct-4的表达等方法对其进行鉴定，检测结果呈阳性。将PGCs分别接种于MEF、REF制成的不同密度饲养层来确定种属跟密度的最适宜培养条件;当培养液中血清含量不同以及是否添加细胞因子LIF时，对于PGC培养的影响，并选出最佳的方案。得出以下结论:①在14-18d的兔胚胎生殖嵴中均可得到PGCs;②兔原始生殖细胞接种于用兔胚胎成纤维细胞所制成的密度为6×104的饲养层上生长状况、集落形态情况最好，分化速度较慢，此为饲养层的最适条件。③优化了培养方案，用此方案可得到更多的集落，且集落维持未分化状态的时间更长，培养液成分:高糖DMEM+1％NEAA+1％双抗+2mmol/L L-谷氨酰胺+0.1mmol/Lβ-巯基乙醇+20ng/mL LIF+15％FBS。