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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合症(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原。组织中高含量的病毒血症、PCV2病毒载量、肉芽肿性炎症、淋巴细胞减少和因免疫抑制造成的淋巴系统功能紊乱是严重感染PCV2的特征。目前预防猪圆环病毒2型感染的主要手段是疫苗接种。我国PCV2商品化疫苗包括全病毒灭活疫苗、原核系统表达的病毒样颗粒(VLP)疫苗、杆状病毒载体系统表达的亚单位疫苗等,但普遍存在的问题是灭活疫苗和亚单位疫苗抗原量不高,或是纯化抗原中内毒素残存量较多,导致免疫效果低下及副作用明显;很多大型猪场选择采用进口疫苗,但进口疫苗价格昂贵。为解决这些问题或缺陷,本研究采用Bac-to-BacTM杆状病毒表达载体系统,构建了高效表达PCV2 Cap蛋白的重组杆状病毒。本研究的主要内容如下:1对转移载体pFastBacI进行了改造,即polh启动子后连接了另一个启动子,采用了双启动子策略;同时,在polh启动子上游增加了同源增强子调控元件。2 Cap蛋白的N端突变了NLS序列及C端加入了6×His标签,Cap蛋白密码子进行优化合成后,克隆到pFastBacI多克隆位点,构建表达质粒。3重组杆粒转染到Spodoptera frugiperda 9(Sf9)细胞,拯救获得重组杆状病毒,建立了毒种库;经表达条件优化,使重组cap蛋白在Trichoplusia ni-derived High FiveTM(H5)悬浮细胞中获得了高效表达。4利用重组蛋白配制的疫苗肌肉免疫小鼠,首免后第14天进行第二次免疫,于第21、28、35和42天收集血清,同时以灭活疫苗、商品化亚单位疫苗、野型杆状病毒和PBS为对照,最后通过ELISA方法进行免疫效果比较及评价。本研究获得的结果:1通过改造杆状病毒载体表达盒、质粒筛选、鉴定和转染,获得了携带PCV2Cap蛋白的重组杆状病毒。2通过表达条件优化,Cap蛋白在H5悬浮细胞中获得高效表达,表达量在150mg/L以上。3通过cap蛋白配制的疫苗免疫小鼠,证明该重组蛋白诱导的抗体水平明显优于商品化全病毒灭活疫苗和原核表达亚单位疫苗。