论文部分内容阅读
目的：溃疡性结肠炎(UC)是一种病因尚未完全阐明的慢性炎症性肠病，主要临床表现是腹泻、粘液脓血便、腹痛和里急后重，少数患者有便秘，有的还伴有关节、皮肤、眼、口及肝胆等肠外表现，常缠绵难愈，多反复发作，且与结肠癌关系密切。近年来，现代医学有关UC发病的免疫学机制受到广泛关注，并取得较大进展，但是尚缺乏疗效显著、副作用小的治疗药物。中医理肠四方(乌梅丸、白头翁汤、参苓白术散、痛泻要方)是用来治疗UC常用方剂和方法。它们虽在临床上都有一定疗效，但缺乏彼此之间的对比和实验依据。本课题拟通过建立UC大鼠模型来研究理肠四方对UC的治疗作用及其分子免疫学机制，特别是通过观察它们对UC大鼠细胞因子、细胞凋亡的影响，为中医药治疗UC提供一定实验基础和理论依据，进而为揭示中医药治疗该病的基本规律取得突破打下基础，为临床用药提供理论指导。 方法：将SD大鼠98只(雌雄各半)随机为7组，分别为对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、乌梅丸组、白头翁汤组、参苓白术散组，痛泻要方组，每组14只。除正常对照组外，其余6个组均采用免疫加局部刺激(2,4二硝基氯苯加醋酸)复合法，成功复制UC大鼠模型。分别观察蒸馏水、SASP、乌梅丸、白头翁汤、参苓白术散、痛泻要方治疗UC大鼠后一般状况的变化；用免疫组化法检测病变结肠粘膜局部免疫指标IL-10、IL-6、IL-8、TNF-α含量的变化及Bcl-2、Bax、Fas的蛋白表达；用原位杂交检测病变结肠粘膜TNF-αmRNA表达；用原位末端标记检测结肠粘膜细胞凋亡；并观察结肠病理改变及超微病理结构的变化情况。 结果：(1)模型组促炎细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α含量高于正常对照组(P＜0.01)，抗炎细胞因子IL-10含量低于正常组(P＜0.01)；理肠四方各组、SASP组IL-6、IL-8、TNF-α低于模型组(P＜0.01)，IL-10高于模型组(P＜0.01)；乌梅丸组、白头翁汤组、参苓白术散组IL-6、IL-8、TNF-α低于SASP组(P＜0.05或P＜0.01)，IL-10则高于SASP组(P＜0.05或P＜0.01)；痛泻要方组IL-6、IL-8、TNF-α含量高于SASP组(P＜0.05)，IL-10低于SASP组(P＜0.05)；乌梅丸组、白头翁汤组、参苓白术散组IL-6、IL-8，TNF-α低于痛泻要方组(P＜0.05或P＜0.01)，IL-10高于痛泻要方(P＜0.05或P＜0.01)；乌梅丸组、白头翁汤组IL-6、IL-8、TNF-α低于参苓白术散组(P＜0.05或P＜0.01)，IL-10则高于参苓白术散组(P＜0.05或P＜0.01)；乌梅丸组IL-6、IL-8、TNF-α低于白头翁汤组(P＜0.05或P＜0.01)，IL-10高于白头翁汤组(P＜0.01)。 (2)模型组TNF-αmRNA的表达阳性程度(以平均光密度、平均灰度计算)高于正常组(P＜0.01)；乌梅丸组TNF-αmRNA表达的阳性程度比模型组明显降低(P＜0.05或P＜0.01)；乌梅丸组TNF-αmRNA表达的阳性程度比白头翁汤组，痛泻要方组亦有所降低(P＜0.05)；SASP组TNF-αmRNA阳性程度与白头翁汤组、参苓白术散组、痛泻要方组无明显差别(P＞0.05)。 (3)理肠四方各组的结肠细胞凋亡指数低于模型组(P＜0.05或P＜0.01)，与正常组比较无明显差别(P＞0.05)；模型组Bcl-2蛋白表达阳性率低于正常组(P＜0.01)，Bax、Fas表达高于正常组(P＜0.01)，但模型组Bcl-2／Bax＞1与正常组Bcl-2／Bax＜1比较有显著意义(P＜0.01)；理肠四方各组Bcl-2、Bax、Bcl-2／Bax、Fas蛋白表达阳性率与正常组无显著意义(P＞0.05)，而比模型组低且有显著差博士伦我理肠，方对茂疡牲份肠炙大民归脸.井城佃脸润亡的令响异(P<0.05);理肠四方各组Bel一2、Bax、Bel一2瓜ax、Fas之间及其与SASP组比较均无显著意义(P>0.05)o (4)模型组症状可见粘液稀便、甚至脓血便、消瘦、徽动、畏寒、毛发无光泽、食欲减退、体重减轻(P<0.01)等，理肠四方各组及SASP组治疗后症状均有不同程度改善(未行统计统学处理);模型组结肠组织损伤积分比理肠四方各组、SASP组高(P<0.05或P<0.01)，而乌梅丸、白头翁汤组、参芬白术组比SASP组低(P<0.05或P<0 .01)，痛泻要方组与SASP组无显著差异(P>0.05);病理切片及超微病理结构显示细胞凋亡参与UC形成，且乌梅丸组疗效优于其它各组及SASP组(未进行统计学处理). 结论:以上实验结果表明:(l)该实验造模是成功的.(2)促炎细胞因子IL一6、IL一8、TNF一a、抗炎细胞因子IL一10均参与UC形成，理肠四方通过升高抗炎细胞因子IL一1叮、降低促炎细胞因子IL一6、IL一8、翎F-a等，来调节UC结肠粘膜局部异常的免疫反应。(3)理肠四方均有抗细胞凋亡作用，以减轻炎症损害、抑制肠道炎症反应，以达到治疗UC的目的.(4)理肠四方均有治疗UC作用，其中以乌梅丸最好，白头翁汤、参答白术散次之，痛泻要方稍差.该实验也提示我们在临证治疗UC时仍要辨证施治。