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目的神经干细胞(neural stem cells,NSCs)具有多分化潜能,可促进中枢神经系统损伤后神经再生与修复;而神经干细胞向神经元方向分化是补偿受损的神经细胞及重建神经环路中的关键,促进神经干细胞向神经元方向分化的干预成为神经干细胞研究亟待解决的关键问题。丙戊酸(valproic acid,VPA)是一种神经营养化合物,能促进神经元再生、保护神经元、促进分化并促进轴突再生,但其诱导神经干细胞分化并促进神经干细胞来源的神经元突起生长的具体机制尚不清楚。本课题通过分离培养E13.5天的胎鼠脑皮层神经干细胞,研究VPA对胎鼠脑皮层神经干细胞的诱导分化及神经干细胞来源的神经元突起的作用,并应用JNK特异性抑制剂SP600125,探讨JNK在VPA介导的胎鼠神经干细胞向神经元方向分化及神经干细胞来源的神经元突起生长中的作用。方法本实验首先对C57BL/6J胎鼠(E13.5天)脑皮层神经干细胞进行分离、培养和纯化,通过体外培养的形态学观察、免疫细胞化学染色来鉴定神经干细胞;将第三代神经干细胞球传代后转移到多聚赖氨酸包被的培养孔板中,分化培基进行培养,且实验组加VPA。利用免疫印迹试验(Western blot)、免疫细胞化学染色及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等技术,观察VPA对胎鼠脑皮层神经干细胞分化方向及神经干细胞来源的神经元突起的作用,并进行统计分析,比较神经干细胞向神经元、星形胶质细胞的分化比例及神经元突起生长情况。同时应用JNK的特异性抑制剂SP600125,观察VPA对胎鼠神经干细胞作用的变化,研究JNK在VPA介导的胎鼠神经干细胞向神经元方向分化及神经干细胞来源的神经元突起生长中的作用。结果实验成功分离纯化C57BL/6J胎鼠(E13.5天)脑皮层神经干细胞,通过形态学观察、免疫细胞化学染色鉴定,证实其具有神经干细胞特性。通过Western blot及细胞免疫荧光染色检测,证实VPA促进胎鼠脑皮层神经干细胞向神经元分化的细胞比例及蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.001),而胎鼠脑皮层神经干细胞向星形胶质细胞的比例及蛋白表达显著性降低,差异具有统计学意义(P<0.001),少突胶质细胞分化的细胞比例与蛋白表达无统计学意义上的改变(P>0.05);β-Ⅲ-tubulin免疫荧光染色证实,VPA促进神经干细胞来源的神经元突起总长度、轴突长度、平均长度相比于对照组增大,差异具有统计学意义(P<0.001,P<0.001,P<0.001)。应用SP600125抑制JNK,VPA介导的神经干细胞向神经元方向分化下调,神经干细胞来源的突起生长下调。结论VPA促进E13.5天的C57BL/6J胎鼠脑皮层神经干细胞向神经元方向分化,并促进神经干细胞来源的神经元突起生长;JNK参与VPA介导的胎鼠神经干细胞向神经元方向分化及神经干细胞来源的神经元突起生长。