【摘 要】
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饮食结构的改变被认为是食物过敏的发病率逐年增长的潜在驱动因素。现已证明,西方的高脂肪和低膳食纤维饮食可以影响食物过敏的易感性。而高盐饮食对食物过敏的影响尚不清楚。研究表明,高盐饮食可以影响机体的免疫系统,特别是可以调节Th17和Treg细胞的功能。因此,本论文以食物过敏反应中KU812细胞（嗜碱性粒细胞）和Caco-2细胞（一种重要的肠上皮细胞）为对象,研究高盐暴露对卵白蛋白（OVA）引发食物过敏
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饮食结构的改变被认为是食物过敏的发病率逐年增长的潜在驱动因素。现已证明,西方的高脂肪和低膳食纤维饮食可以影响食物过敏的易感性。而高盐饮食对食物过敏的影响尚不清楚。研究表明,高盐饮食可以影响机体的免疫系统,特别是可以调节Th17和Treg细胞的功能。因此,本论文以食物过敏反应中KU812细胞（嗜碱性粒细胞）和Caco-2细胞（一种重要的肠上皮细胞）为对象,研究高盐暴露对卵白蛋白（OVA）引发食物过敏KU812细胞脱颗粒的影响,并通过转录组学的分析手段,初步研究高盐对KU812细胞释放IL-4（促炎因子）的作用机制;最后,利用体外肠道上皮细胞Caco-2模型和小鼠动物试验,研究高盐对肠道屏障功能的影响。研究的方法、结果及结论如下:1.采用OVA致敏的KU812细胞脱颗粒模型,研究高盐对细胞脱颗粒的影响。与阳性对照组相比,高盐组的组胺和β-氨基己糖苷酶的释放量无显著性差异（P＞0.05）;两组间的IL-6和TNF-ɑ释放量具有显著性差异（P＜0.05）,高盐组分别增加239.78 pg/m L和1.8 pg/m L。在m RNA水平上,高盐组的IL-6、TNF-ɑ和IL-4释放量也呈显著性升高（P＜0.05）。高盐可以促进OVA致敏的KU812细胞分泌促炎细胞因子IL-6、TNF-ɑ以及IL-4,不能促进其分泌组胺和β-氨基己糖苷酶。高盐能够加重食物过敏阶段KU812细胞的炎症因子反应。2.分别采用SGK1和P38抑制剂对KU812细胞产生IL-4进行干预实验,研究高盐促进KU812细胞产生IL-4的分子机制。结果表明:高盐可以促进KU812细胞产生IL-4,并使NFAT5和SGK1基因的表达被提高。同时也发现:在高盐条件下,SGK1抑制剂可以显著性抑制KU812细胞表达SGK1和IL-4基因;而P38抑制剂可以显著性抑制KU812细胞表达NFAT5、SGK1和IL-4基因。因此,高盐会通过P38-NFAT5-SGK1信号通路来促进KU812细胞产生IL-4,IL-4同时也是Th2型细胞免疫的关键细胞因子,高盐也可以促进食物过敏的产生。3.运用转录组测序技术（RNA-seq）分析高盐对KU812细胞释放促炎因子IL-4的机制。通过DNBSEQ平台对差异基因分析,共筛选出437个差异基因,其中有293个转录水平表达被上调,144个转录水平表达被下调。通过KEGG和GSEA的结果,高盐对KU812细胞影响的机制包括有PI3K-Akt、MAPK、Rap1、m TOR、Fox O和Wnt信号通路的参与,其中Wnt、MAPK和Rap1信号通路被显著性激活,并可能起主导作用,P38、NFAT5和SGK1基因也会参与其中。4.Caco-2细胞经高盐处理后,分别采用Q-PCR和Western-Blot二种方法检测其中ZO-1、Occludin以及Claudin-1蛋白表达量,高盐可以不同程度降低这三种蛋白的表达量。其中,Q-PCR的检测结果为ZO-1（P＜0.01）和Occludin（P＜0.05）基因的表达量显著下降,但Claudin-1基因的表达量下降不显著（P＞0.05）。Western-Blot实验结果为ZO-1蛋白的表达量显著降低（P＜0.05）,但Occludin和Claudin-1蛋白的表达量下降不显著（P＞0.05）。高盐会破坏Caco-2细胞紧密连接蛋白的功能,导致其通透性增加。5.试验小鼠经高盐饮食（4.0%NaCl的饲料+1.0%NaCl的饮用水）饲喂3周,其肠细胞中的ZO-1、Occludin以及Claudin-1三种蛋白的表达量均出现不同程度的降低。FITC-dextran的实验结果也表明,高盐饮食组小鼠血清中FITC-dextran浓度显著性升高（P＜0.01）。高盐饮食会破坏小鼠肠道屏障,提高小鼠肠道的通透性。
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