1.Slc10溶质转运体家族蛋白的初步晶体学研究;2.内质网相关降解蛋白Derlin-1的初步晶体学研究

来源 :中国科学院大学 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 上海生物化学与细胞 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guofeng1988
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1.Slc10溶质转运体家族蛋白是人体内一类跨膜运输胆汁酸盐,类固醇荷尔蒙,小分子药物等物质的重要膜蛋白,与人类多种重大疾病都密切相关。到目前为此,该家族蛋白共有7个成员得到了鉴定,包括钠/牛磺胆酸共转运体蛋白NTCP(Slc10A1),肠道钠依赖胆酸转运体蛋白ASBT(Slc10A2), Slc10A3, Slc10A4, Slc10A5,钠依赖有机阴离子转运体蛋白SOAT(Slc10A6)和Slc10A7。鉴于该家族蛋白的重要意义以及结构信息的匮乏,本人在博士后期间对人源Slc10家族蛋白在真核生物的同源物开展了大量的结构生物学研究工作。通过昆虫表达系统,共克隆、表达了包括钠/牛磺胆酸共转运体蛋白NTCP在拟南芥中的同源物AtSlc10A1,肠道钠依赖胆酸转运体蛋白ASBT在黑腹果蝇中的同源物DmSlc10A2以及黑腹果蝇中SlcA4的同源物DmSlc10A4在内的三种蛋白,分别利用坐滴扩散和脂立方相二种研究手段对上述三种蛋白进行结晶尝试,最终通过坐滴扩散获得了DmSlc10A4的晶体。然后我们对晶体进行了去垢剂和添加剂的优化,在上海同步辐射进行了衍射实验,最高分辨率达到6-7埃左右。  2.Derlin-1又称为内质网相关降解蛋白1,编码该蛋白的基因在高等生物中高度保守。人源Derlin-1由251个氨基酸残基组成,约为29kDa,它是一个定位在内质网膜上的四次跨膜蛋白,主要负责将错误折叠蛋白从内质网腔转运到到细胞质内来进入降解通路。Derlin-1对维持内质网生理功能稳态、防止疾病的发生起着重要作用。为了更好的研究错误折叠蛋白的转运及降解过程,我们展开了对人源Derlin-1蛋白的结构生物学研究。利用昆虫表达体系,我们克隆、表达、纯化了人源Derlin-1蛋白,并通过坐滴扩散和脂立方相二种研究手段对该蛋白进行结晶尝试。
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