前言： 晚期前列腺癌由于出现非激素依赖型克隆是其治疗失败原因，其发病机理至今未完全阐明，可能与雄激素受体以及其他因子对肿瘤调控有关。L-plastin是人肌动蛋白结合蛋白家族中的一个亚型，L-plastin在前列腺癌中高达，且受雄激素和雌激素上调，可能是通过其启动子上三个雄激素受体结合位点(ARE)和一个雌激素受体结合位点(ERE)起作用。但是其作用机制并不清楚。L-plastin不仅在激素依赖前列腺癌LNCaP细胞中表达，在无激素血清培养基中的LNCaP细胞和非激素依赖型前列腺癌细胞株以及临床上非雄激素依赖型前列腺癌也表达，提示存在甾体激素受体以外的的其它因子参与它的转录调控。 材料与方法： 提取LNCaP细胞中的DNA作为模板，扩增L-plastin启动子5端2.3kb，采用定点突变技术依次切除启动子上ARE1、ARE2、ARE3、ERE序列并构建相应的重组荧光素酶质粒ΔARE1，ΔARE1，2，ΔARE1，2，3和ΔARE1，2，3-ΔERE，巢式分段切除Δ4，产生依次减少5’约200bp的启动子序列，荧光素酶活性检测启动子及各突变体活性。用软件分析L-plastin启动子近3’端206个(-206 to 1)碱基序列上可能的转录因子结合位点，并用凝胶滞后实验及超滞后实验检测结合在上面转录因子。发现启动子-1751位点不同序列后，检测含有不同碱基-1751C／T的L-plastin启动子的荧光素酶活性；巢式PCR，单链构象多态性分析和银染，测序检测前腺癌患者，前列腺癌-癌旁组织和前列腺癌细胞株碱基-1751序列。凝胶滞后实验和超滞后实验检测结合于启动子-1751C/T上转录因子，免疫印迹实验检测正常及前列腺癌细胞中鉴定转录因子表达情况。 结果： 双氢睾酮刺激后，L-plastin启动子及其所有突变体荧光素酶活性明显升高。切除ARE1突变体的荧光素酶活性比天然的启动子荧光素酶活性降低了1.5倍。切除ARE1、2突变体的荧光素酶活性比突变体1下降2.5倍，切除ARE1-3和ERE突变体比突变体3下降4倍。虽然突变体3的荧光素酶活性比未经处理的启动子低，但是比突变体2高2倍。 巢式切除突变体4 5’端，产生大约每次减少200 bp大小的序列结构，荧光素酶活性实验结果显示雄激素刺激提高了L-plastin启动子-612～+118bp的序列结构的荧光素酶活性。一个206bp大小的片段显示出相对强的基线荧光素酶活性，双氢睾酮刺激后荧光素酶活性无明显升高。 凝胶滞后实验鉴定多个转录因子结合于-206～+1序列上，通过凝胶滞后实验与超滞后实验，在激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP和非激素依赖型前列腺癌细胞株PC-3中证实非甾体激素转录因子AP-4和SP-1结合在L-plastin启动子-206～-177，-55～-26片段上，荧光素酶活性实验表明删除AP-4和SP-1结合位点后荧光素酶活性减低。免疫印记实验和免疫组化实验结果表明AP-4和SP-1在前列腺癌细胞株和组织中过度表达。 发现L-plastin启动子-1751位点不同序列C／T，pGL3-LP-P-1751C具有较pGL3-LP-P-1751T强的荧光素酶活性；两者受DHT刺激后荧光素酶的活性升高.提示该位点不同序列与L-plastin启动子转录活性密切相关。用巢式PCR，SSCP技术，银染及测序技术证实L-plastin启动子-1751位点不同序列为单核苷酸多态性。凝胶滞后实验和超滞后实验证明NKX3.1特异地结合到L-plastin启动子-1751T位点附件的序列。免疫印迹试验证明NKX3.1在前列腺癌细胞株中过度表达，DHT上调NKX3.1表达。 　　结论： 1.在L-Plastin启动子转录活性中ARE1、ARE2，ARE3和ERE起促进或者抑制作用，启动子上还有其他雄激素作用元件，而非甾体类转录因子作用元件主要存在于靠近转录起始点区域，AP-4和SP-1是结合于该区域的2个转录因子，在前列腺癌细胞和组织中过表达，是在无激素条件下上调L-plastin表达的两个重要转录因子。 2.鉴定一个普遍存在于前列腺癌的L-plastin基因启动子的多态性位点-1751C／T，转录因子NKX3.1特异地结合于含有该多态性位点的序列上，且与含-1751 T序列具有更强的结合能力，NKX3.1因多态性位点-1751上序列不同而可能对L-plastin表达抑制程度不同。