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实验背景缓慢激活延迟整流钾电流(IKs)是参与人心肌细胞动作电位复极,特别是平台期形成与维持的重要外向离子流。IKs通道由KCNQ1基因编码的α亚单位及KCNE1基因编码的β亚单位组成。hKCNQ1/hKCNE1基因突变或慢性心肌肥厚、慢性心力衰竭等病理过程均可导致IKs功能异常,引起遗传性或获得性长QT综合征,LQTS易引起尖端扭转型室性心动过速等心律失常,从而危及病人生命。深入研究IKs通道的药理特性将可能为此类心律失常的防治提供新线索。丹参酮ⅡA是丹参的脂溶性成分之一,主要分布于丹参根皮部,本质部有少量分布。其磺化产物丹参酮ⅡA磺酸钠易溶于水,在临床上被广泛用于冠心病、心肌梗死等疾病的辅助治疗。但是丹参酮ⅡA磺酸钠对于人心肌细胞IKs电流的作用目前尚不清楚。目的与方法第一部分:将分别编码IKs通道α亚单位及β亚单位的KCNQ1、KCNE1基因共转染HEK293细胞,潮霉素B筛选,电生理学及药理学方法鉴定,观察hKCNQ1/hKCNE1通道的电生理学特性和药理学特性与野生型人心肌细胞IKs通道是否相似。第二部分:主要运用膜片钳技术,探讨丹参酮ⅡA磺酸钠对于稳定表达的人心肌细胞IKs电流的作用、对IKs电流激活曲线的影响以及对其激活和去激活时间的影响。实验结果第一部分:1.稳定表达hKCNQ1/hKCNE1基因的细胞上可记录到缓慢激活、无明显失活、具有明显尾电流的外向电流,该电流激活电压大于?40mV,具有明显的电压依赖性;在未转染hKCNQ1/hKCNE1基因的HEK293细胞上只记录到很小的背景电流。2.细胞外钾离子浓度越大,反转电位负值越大,表明hKCNQ1/hKCNE1电流主要是通道对钾离子通透引起。3.选择性IKs通道阻断剂Chromanol293B对hKCNQ1/hKCNE1电流具有明显的、可逆的抑制作用,其IC50（+40mV）为9.1μmol/L。4.无钾细胞外液能显著增加hKCNQ1/hKCNE1电流,在去极化刺激为+40mV时增加幅度为（28.6±2.0）%（P<0.01,n=8）。第二部分:1.丹参酮ⅡA磺酸钠可以增加稳定表达的人心肌细胞IKs电流的幅度,其作用呈浓度依赖并且可逆,EC50（+40mV）为64.5μmol/L。2.30μmol/L的丹参酮ⅡA磺酸钠使IKs电流激活曲线左移而对斜率无影响,30μmol/L的丹参酮ⅡA磺酸钠和对照组的V0.5分别为（16.1±1.2）mV、（24.1±1.9）mV（P<0.05,n=7）;S分别为19.1±2.3、17.6±2.4（P>0.05,n=7）。3.丹参酮ⅡA磺酸钠减小IKs电流的激活时间常数（-20mV至+40mV,n=7,P<0.05）,增大IKs电流的去激活时间常数（-90mV至-40mV,n=7,P<0.05）。结论第一部分:已经成功构建稳定表达人心肌细胞IKs电流的细胞模型,其电生理学特性和药理学特性与野生型人心肌细胞IKs电流相似,可以作为研究人心肌细胞IKs电流功能的细胞模型。第二部分:丹参酮ⅡA磺酸钠能够可逆地增大稳定表达的人心肌细胞IKs电流,其作用呈浓度依赖,使IKs电流激活曲线左移而对斜率无影响,丹参酮ⅡA磺酸钠加快IKs电流激活过程,减慢IKs电流的去激活过程。