氯咪巴唑在斑马鱼体内的生物富集与代谢干扰效应研究

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作为抗真菌活性成分,氯咪巴唑被广泛使用并源源不断地被排放进入环境,成为一种环境污染物,然而,目前对氯咪巴唑的生物富集、生物转化和代谢干扰效应研究数据较少,氯咪巴唑对环境的潜在危害依旧有待评估。本研究探究了氯咪巴唑在斑马鱼体内的生物富集现象,实验发现,在短期暴露期间,氯咪巴唑的生物富集现象主要发生在肝脏,在脑和肌肉中未观察到明显的生物富集现象,这可能是肝脏作为解毒器官,更易于吸收外源性污染物;斑马鱼对氯咪巴唑的生物富集与浓度相关,随着水体氯咪巴唑浓度的增加,氯咪巴唑在斑马鱼肝脏的浓度逐渐升高,但升高幅度逐渐减小。这意味着,在低浓度下,氯咪巴唑的生物富集效应更加明显,暴露于低浓度的氯咪巴唑可能导致比估算值更大的环境风险。在100 ng/L浓度下,其在肝脏的稳态BCF(BCFSS)为258.3,log BCF为2.41,略高于预测值(2.15);接着,通过体外肝微粒体孵育实验及斑马鱼成鱼暴露,发现了氯咪巴唑在斑马鱼体内代谢产生的三种代谢产物,涉及还原、氧化、磺化等反应,并预测了其中一相代谢产物的毒性。预测结果表明,氯咪巴唑还原产物毒性与母体接近,而氧化产物的可能结构中,除咪唑环氧化外,毒性均低于母药;随后,本研究针对斑马鱼胚胎样本的基于GC-MS的代谢组学研究方法,进行了比较和优化。结果表明,当进行4-氯苯丙氨酸标准化、样品均质化和纯甲醇与超声提取相结合时,可实现更好的重复性、更高的信号和更广泛的检测到的代谢物覆盖范围。大多数标准品的回收率和标准偏差分别在82%-121%和6.6%-12%的范围内,而主要检测到的代谢物的相对标准偏差在5.4%至19%的范围内,表明提取效率和方法精密度较好。通过使用开发的代谢组学方法,我们在斑马鱼胚胎样品中发现了270种提取代谢物,鉴定出87种包括糖、胺、氨基酸、核苷酸、脂肪酸和甾醇等重要的内源代谢物,例如柠檬酸和次黄嘌呤。最后,利用上述实验优化的基于GC-MS的代谢组学方法和脂质组学手段,对环境浓度氯咪巴唑暴露后的斑马鱼胚胎的代谢干扰效应进行了探究。研究证明,环境浓度氯咪巴唑(100 ng/L)和100倍环境浓度氯咪巴唑(10000 ng/L)暴露对斑马鱼胚胎代谢的影响相似,这可能与不同浓度下氯咪巴唑的生物富集效应不同有关;氯咪巴唑暴露可以起牛磺酸、肌醇、泛酸、胆固醇等的显著变化;环境浓度氯咪巴唑暴露即可引起甾醇代谢的显著异常,导致甾醇酯含量在斑马鱼胚胎内的显著下调和胆固醇浓度的显著上调。同时,通过酶联免疫吸附试验检测到雌二醇和11-酮基睾酮的显著下调。这意味着环境浓度下,氯咪巴唑可能会对鱼类的性别分化、繁殖行为和种群数量产生影响。本论文结果对于在水生环境中对氯咪巴唑的风险评估具有意义,为政府制定相关防治措施提供重要的参考。
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