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目的:变形链球菌(Streptococcus mutans,简称变链菌)是构成牙菌斑的重要成分,也是形成龋病的重要致病菌之一。对于变链菌来说,F-ATP酶与其耐酸性及致龋性密切相关。本研究克隆及分析变链菌F-ATP酶的β亚基基因,目的是从分子基因的角度进一步探寻变链菌F-ATP酶对其耐酸性和致龋性的作用;另外,构建含变链菌质子移位ATP酶基因的重组质粒,可为进一步转化变链菌,通过同源重组构建变链菌基因缺陷株奠定基础。总之,研究F-ATP酶等致龋相关酶能够为龋病的预防和治疗开辟新途径。 方法:本实验首先在厌氧条件下培养变链菌,提取变链菌基因组DNA,再采用PCR方法,以变链菌基因组DNA为模板扩增F-ATP酶β亚基5′末端序列,将克隆片段与载体pVA891酶切后连接,形成重组质粒;将重组质粒转化大肠杆菌,对转化后大肠杆菌和未转化大肠杆菌的F-ATP酶活性进行比较和分析;尝试将重组质粒转化变链菌,对变链菌标准株和耐氟株的转化能力作一初步的分析。 结果:构建的重组质粒经PCR、酶切电泳及测序鉴定显示序列正确;变链菌F-ATP酶β亚基基因的克隆片段通过构建重组质粒转化进入大肠杆菌,F-ATP酶活性分析显示转化后大肠杆菌的F-ATP酶活性与未转化的亲代菌株比较具有差异;初步分析变链菌标准株和耐氟株的对质粒的转化能力,显示耐氟株的转化能力高于标准株。 结论:本实验通过对变链菌F-ATP酶β亚基部分基因的克隆及对含目的基因的大肠杆菌进行F-ATP酶活性分析,显示出变链菌F-ATP酶β亚基基因对转化后细菌的F-ATP酶活性具有影响。该实验从分子基因的角度进一步论证了F-ATP酶β亚基基因的重要性。本研究尚不能证实该重组质粒能有效转化变链菌