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目的:树突状细胞（Dendritic cells,DCs）是体内功能特殊的专职抗原提呈细胞（Antigen presenting cells,APCs）,而乳酸环境为多种病理微环境中的显著特征。在多种病理环境下免疫细胞功能的正常发挥常受到阻碍,细胞的生物流变学特性与其免疫学功能密切相关,但是病理微环境中的乳酸对DCs的流变学特性的影响还不得而知。因此本课题通过研究乳酸对DCs生物流变学特性及其转录组表达的影响,为临床上提高基于DCs的免疫治疗提供前期理论依据。方法:分离C57BL/6J小鼠骨髓来源的单核细胞,利用白细胞介素-4（Inerleukins-4,IL-4）和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（Granulocte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF）诱导分化为未成熟树突状细胞（Immature dentric cells,im DCs）,添加脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）可将其诱导为成熟树突状细胞（Mature dentric cells,m DCs）。为探究乳酸对im DCs及其成熟过程中生物流变学特性的影响,将im DCs分为四组,分别加入0 mmol/L（m M）乳酸、20 m M乳酸、0 m M乳酸+LPS和20 m M乳酸+LPS的条件培养基处理细胞;0 m M、20 m M乳酸组在处理1 h、4 h、24 h收集细胞,0 m M乳酸+LPS和20 m M乳酸+LPS组在处理24 h收集细胞;以0 m M乳酸组和0 m M乳酸+LPS组分别作为乳酸组和乳酸+LPS组的对照组。为了探究离开乳酸环境后im DCs及其成熟过程中生物流变学特性的影响,将im DCs在含20 m M乳酸的培养基中孵育4 h后更换为0 m M乳酸或0 m M乳酸+LPS的条件培养基继续培养,收集细胞。用细胞增殖检测试剂盒（Cell counting kit 8,CCK8）法检测细胞活力,Transwell法检测细胞迁移能力,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架纤维型肌动蛋白（Fibrous actin,F-actin）的变化,Cytation 5显微镜观察细胞骨架球状肌动蛋白（Globular actin,G-actin）的变化,实时荧光定量PCR法检测促聚蛋白（Profilin）、丝切蛋白1（Confilin1）、成束蛋白1（Fascin1）和加帽蛋白（Cap Z）等细胞相关骨架结合蛋白的表达量,细胞电泳法检测细胞电泳率以及混合T淋巴反应法检测m DCs刺激T细胞增殖的能力。此外利用转录组测序法探究乳酸对im DCs基因组表达的影响,获得差异表达基因,通过蛋白互作（Protein-protein interaction,PPI）网络图的构建筛选到关键节点基因。将获得的差异表达基因进一步通过基因本体（Gene ontology,GO）分析差异表达基因参与的细胞组分、分子功能及生物过程;京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genome,KEGG）分析差异表达基因富集的信号通路。结果:乳酸能显著抑制DCs的迁移能力、降低DCs的电泳率、减少细胞骨架F-actin含量、提高细胞骨架G-actin含量、升高细胞骨架相关蛋白Profilin和Confilin1表达量、降低细胞骨架相关蛋白Fascin1和Cap Z的表达量;另外,乳酸还能显著抑制m DCs刺激同种异体T细胞的增殖能力;在离开乳酸环境后其生物流变学特性未恢复。转录组学结果显示,乳酸处理使im DCs中915个基因表达发生变化（│log2FC│≥1,FDR≤0.001）,其中上调基因170个,下调基因745个。通过PPI构建筛选到Cd38、Hmgcr、Hspa1b、Hspa1a、Hmox1、Stat1、Ccl2、Ccr7、Cd28、Cxcr4、Ctla4、Il13关键节点基因。GO分析显示,上调差异表达基因主要富集在细胞表面、内质网膜及细胞器膜等细胞组分,抗氧化活性、氧化还原酶活性及抗氧化活性等分子功能,凋亡过程、类固醇生物合成过程及脂质代谢过程等生物过程;下调差异表达基因主要富集在细胞膜、细胞骨架、微管等细胞组分,趋化因子受体活性、细胞因子受体活性、趋化因子结合等分子功能,正调控T细胞增殖、细胞粘附、细胞内信号转导等生物过程。KEGG分析显示,上调基因主要影响MAPK信号通路、VEGF信号通路等,下调基因影响细胞因子与细胞因子受体相互作用、PI3K-Akt信号通路等。结论:乳酸能显著影响im DC及其成熟过程中其生物流变学特性,包括细胞迁移能力、细胞骨架（F-actin、G-actin）、电泳率、及刺激T细胞增殖等,且离开乳酸环境后其生物流变学特性未能恢复正常,说明乳酸对DCs的影响可能是持续性的。转录组学结果表明乳酸对im DCs基因组表达具有调控作用,差异表达基因尤其是下调差异表达基因的GO和KEGG富集分析发现,乳酸对im DCs的细胞迁移能力、细胞骨架结构、细胞粘附及抗原提呈能力等生物流变学特性有显著影响。进一步得出乳酸可能在调控im DCs的免疫功能中起着抑制作用,并且可能通过影响im DCs的生物流变学特性进而阻碍DCs免疫功能的正常发挥。