【摘 要】
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传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病毒（Infectious bursal diesase virus,IBDV）引起雏鸡的一种免疫抑制性疾病,近60年来共发生了两次大的变异,先后出现了经典毒株、变异株和超强毒株,它们的致病性和抗原性均存在较大的差异。目前我国IBDV仍然广泛流行,存在多种亚型毒株并存,以致出现非典型感染,而由于没有明显的典
【基金项目】
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山西省高校科技创新项目2019L0371； 山西省高等教育“1331工程”重点创新团队提质增效建设计划项目（20211331-13）；
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传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病毒（Infectious bursal diesase virus,IBDV）引起雏鸡的一种免疫抑制性疾病,近60年来共发生了两次大的变异,先后出现了经典毒株、变异株和超强毒株,它们的致病性和抗原性均存在较大的差异。目前我国IBDV仍然广泛流行,存在多种亚型毒株并存,以致出现非典型感染,而由于没有明显的典型症状以及继发其他传染性疾病,无法做出根本治疗,对养殖业造成了巨大的经济损失。随着饲养环境的改善和疫苗的广泛应用,IBDV超强毒株（vv IBDV）的流行正在被有效控制。然而近年来,IBDV变异株（v IBDV）在我国主要养禽地区广泛流行,在肉鸡群和蛋鸡群中都可检测到该毒株,对变异株进行分离鉴定等研究将为该病的防控奠定基础。本试验主要对IBD疑似病料通过逆转录聚合酶链式扩增（RT-PCR）鉴定,鸡胚分离培养,收集鸡胚尿囊膜并测序后,成功获得3株IBDV分别命名为GD-1、GD-2和GD-3。用Megalign软件和MEGAX64序列分析软件对病毒VP1基因和VP2基因分别进行同源性对比分析及构建进化树进行分析,结果表明GD-1是新型变异株,基因型为A2d B3;GD-3和GD-2为超强毒株,基因型为A3B1。其中核苷酸同源性分析结果为GD-1 A片段与新型变异株SHG19、SHG120同源性最高为98.7%,基因型为A2d,B片段与HLJ0504的同源性最高为98.8%,基因型为B3;GD-2和GD-3 A片段与HLJ0504同源性最高分别为96.0%与96.2%,基因型为A3型,GD-2 B片段与SHG19的同源性最高为99.0%,基因型为B1,GD-3 B片段与F52/70毒株的同源性最高为98.2%,基因型为B1。氨基酸比对结果为GD-1与基因型A2d和基因型B3一致,GD-2和GD-3与基因型A3和基因型B1一致。进化树比对结果为GD-1的A片段与SHG19在同一分支上,属于A2d基因型为新型变异株,GD-2和GD-3的A片段与BD399位于同一分支上,属于A3基因型为超强毒株;GD-1的B片段与HLJ0405在同一分支上,基因型为B3,GD-2的B片段与SHG19在同一分支上、GD-3的B片段与F52/70位于同一分支上,基因型为B1。选用新型变异株GD-1不同浓度感染DF-1细胞,结果显示DF-1细胞形态发生改变,从不规则梭形变成圆形,病毒滴度为103.95TCID50/0.1 m L。将新型变异株GD-1用滴鼻点眼的方式感染SPF雏鸡,试验选取32只SPF鸡胚孵化的雏鸡并分为2组:空白组和IBDV感染组,在隔离条件下饲养,对感染组滴鼻点眼接种100 TCID50/200μL GD-1,在攻毒后第3、7、10、14 d采集感染雏鸡的内脏,对雏鸡的免疫器官称重计算免疫指数,并用荧光定量RT-PCR的方法测定各脏器中病毒含量。结果显示,在攻毒后,病毒组的脾脏免疫指数高于空白组,而法氏囊和胸腺的免疫指数低于空白组,空白组所有测量免疫器官的免疫指数随着攻毒后天数的增加而增大,病毒组脾脏的免疫指数随着攻毒后天数的增加先增大之后在攻毒后的第14 d减小,总体上脾脏的免疫指数高于空白组,法氏囊和胸腺的免疫器官低于空白组,雏鸡在感染新型变异毒株后在脏器内积累的病毒滴度会随着感染时间的增加逐渐减少,攻毒后第3 d胸腺的病毒滴度为104.95TCID50/0.1 m L,攻毒后第3、7、10、14 d法氏囊病毒滴度分别为104.57、105.28、105.12、105.01TCID50/0.1 m L。本试验分离得到一株IBDV新型变异株,对DF-1细胞和雏鸡有致病作用,新型变异株IBDV对免疫器官会产生损害,造成雏鸡的免疫抑制,但不会致死。雏鸡感染后,病毒多残留于法氏囊内,并且能在雏鸡体内造成免疫功能下降。
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