研究背景及目的:前列腺癌是指发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤,通常指前列腺腺癌（病理类型中占比超过95%）,是男性中仅次于肺癌的恶性肿瘤。雄激素剥夺疗法（ADT）是晚期前列腺癌的标准治疗手段,然而,18-24个月后,几乎所有患者都会进展为去势抵抗性前列腺癌（CRPC）,一旦患者进入此阶段,会面临更高的死亡风险。越来越多证据表明,雄激素受体基因（AR）及其信号通路的重新活跃,给与了 CRPC细胞强烈的治疗抗性。AR基因编码的雄激素受体蛋白,在细胞质内被激活后,穿梭进入细胞核调控下游靶基因表达。AR基因通过可变剪接产生多种剪接变体蛋白,其配体结合结构域缺失而具有组成型活性,依旧能发挥调控作用,导致雄激素受体轴靶向疗法（ARATT）的相关药物因失去了治疗靶点而失效。找到新方案以解决剪接变体导致的CRPC进展是下一代药物研发的核心方向之一。前人研究发现一种特殊的AR-V23剪接变体蛋白,它具有AR蛋白完整的四个结构域,即具有恩杂鲁胺等药物的所有靶点。同时因其DBD区域插入了 23个氨基酸,而仅存在细胞质活性,不能进入细胞核直接调控下游基因的表达。因此通过调控可变剪接,使AR基因表达更多的AR-V23剪接变体蛋白以及减少其他截短形式的剪接体产生,我们可以直接阻断AR信号通路或恢复癌细胞对靶向AR蛋白相关抗体药物的敏感性,为治疗提供一条新的策略。研究方法:构建AR minigene;在minigene上面进行序列删除突变寻找外显子剪接增强子元件;3’剪接位点的定点突变或多嘧啶束（PPT）的删除突变;构建的质粒单独转染或与反式作用因子共转到HEK293细胞内表达;设计靶向外显子3a和外显子3的大量ASO,使用ASO-walk方法初步筛选最优ASO;通过浓度梯度探索ASO的剂量效应;利用Cy5荧光标记半定量PCR等方法检测了AR minigene或突变体在mRNA水平上外显子3a的列入比例,以分析调控效果;结果:AR minigene可以模拟AR基因的剪接模式,检测到了 AR-V23剪接变体的表达,且经测序验证了外显子3a上序列不存在碱基突变。3’剪接位点的序列保守性差别不大,对外显子3a列入的影响较小;外显子3和3a上不存在较强的外显子剪接增强子（ESE）元件。删除正常3’剪接位点前的多嘧啶束,能有效促进外显子3a列入,在SRSF4、SRSF5或SRSF6等蛋白过表达时,促进效果更加显著。100nM浓度条件下,编号041040、041041、041056、041063的四条ASO将外显子3a列入比提高到了接近100%;10nM浓度条件下,041063促进外显子3a列入的比例仍接近90%。结论:本研究对AR基因外显子3的剪接模式,特别是促进外显子3a列入的方法进行了初步的探索,并得到了几个可以强烈促进外显子3a列入的ASO。通过删除外显子3正常3’剪接位点前的多嘧啶束,并辅以SRSF4、SRSF5或SRSF6等蛋白的过表达,可将外显子3a列入比从不到5%有效提高了 90%左右,找到了一个潜在的药物开发靶点。ASO 041063在低浓度下明显促进外显子3a列入,通过开发ASO来调控可变剪接是行之有效的,进一步开发ASO药物治疗CRPC是值得探索的方向。