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壳聚糖酶（chitosanase, EC3.2.1.132）能专一性催化水解壳聚糖为壳寡糖,在酶法制备壳寡糖中有较高的应用潜力。壳聚糖酶主要存在于细菌、真菌等微生物的细胞中,在单子叶及双子叶植物的不同组织中也有该酶的活性。目前,有关壳聚糖酶的研究主要基于微生物,但其酶活力都相对较低,这极大限制了其应用。本课题就这一问题,针对产壳聚糖酶菌株的分离筛选、壳聚糖酶高产菌株的选育、菌种鉴定、最佳产酶条件以及壳寡糖的酶法制备及其对致病菌的抑制作用进行了以下研究。（1）壳聚糖酶高产菌株的分离筛选。采集虾蟹壳常年堆积的土壤样品,以粉末壳聚糖为唯一碳源,利用透明圈法根据菌株产生的透明圈与菌落直径的比值（D/d）对产壳聚糖酶高产菌株进行初步筛选,再经摇瓶发酵复筛得到了三株优势菌株,再结合三株菌的持续酶活力测定曲线,最终确定了H2为最佳壳聚糖酶产生菌株,其D/d值及相应酶活力分别为4.5±0.5和0.61±0.005U/mL。（2）对壳聚糖酶高产菌株H2进行分类鉴定。根据形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,参照《伯杰细菌分类手册》和《链霉菌鉴定手册》,最终鉴定该菌株为浅玫瑰色链霉菌,命名为Streptomyces roseolus DH。（3）高产壳聚糖酶的发酵条件的研究。为提高酶的产量,对高产壳聚糖酶菌株DH进行发酵条件研究。主要针对菌株DH进行培养基配方及培养条件进行单因素研究。随后进行了发酵条件的优化,由单因素试验确定了温度、初始pH、发酵时间为三个显著性因子,作为响应曲面法优化的因素。借助Design Expert7.0统计软件分析并获得最佳响应值,得到最优发酵条件。综合单因素实验及上述发酵条件优化结果,最终确定一个最佳的产酶条件,其培养基成分（W/V）为:酵母提取物0.5, K2HPO4 0.07, KH2PO4 0.03,NaC1 0.5, MgSO4·7H2O 0.05, 1%的胶体壳聚糖,0.5%的蛋白胨,培养条件为:初始pH 7.2,温度30℃、摇床转速150rpm、装液量100mL/250mL,接种量2%,发酵时间62.5h。优化后DH菌株产酶酶活力由6.10±0.12U/mL提高到6.94±0.29U/mL,即提高了13%。（4）发酵粗酶液的性质及产物壳寡糖的抑菌活性的初步研究。在研究发酵条件温度、初始pH的同时,对酶解条件进行了具体的研究和分析,最终确定出最佳的酶解反应体系为酶解温度为45℃、反应时间为30min、反应pH为5.6。利用DH菌株的发酵液对胶体壳聚糖进行降解,成功制得一定纯度的粉末壳寡糖,其水溶性很好,与市售寡糖有较高的相似性。然后,测定出了自制壳寡糖的脱乙酰度94.41%和聚合度4,这些对其活性有较大的影响,尤其是在抑菌活性方面。初步探讨了浓度为0.5%的自制壳寡糖溶液对致病菌的抑制作用。结果表明,自制壳寡糖对大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）均有抑制作用,但对副溶血弧菌的抑制作用不明显,而对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有较好的抑制效果。