人子宫内膜间充质干细胞移植对小鼠急性肝衰竭的治疗作用及机制研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:daemon999
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目的:探讨人子宫内膜间充质干细胞(human endometrial stromal stem cells,h EMSCs)治疗小鼠急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)的疗效以及相关作用机制,为急性肝衰竭提供新的治疗思路。方法:1.116只C57小鼠饲养在屏障环境中,随机分为空白对照组(CCl4溶剂Oil组)和CCl4致ALF模型组。模型组进一步分为PBS组(细胞溶剂对照)、EMSC组、BMSC组(目前临床试验常用细胞作为阳性对照)四组,每组29只。模型组小鼠腹腔注射50%体积分数的CCl4(CCl4与橄榄油体积比1:1)建立C57小鼠急性肝衰竭模型,剂量为4 ml/kg;Oil组接受等体积CCl4溶剂橄榄油注射。在腹腔注射后4h,PBS组每只小鼠通过尾静脉注射100μl PBS;EMSC组每只小鼠通过尾静脉注射1×10~6个h EMSCs;BMSC组每只小鼠通过尾静脉注射1×10~6个h BMSCs进行细胞移植治疗。2.细胞移植治疗后后1day、2day、3day、7day记录小鼠的存活率。3.取眼球静脉血检测各组小鼠ALF后4h,及细胞移植治疗后1day、2day、3day血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、凝血酶原水平反映小鼠肝功能。4.实验终点留取肝脏组织,切片进行HE及DHE染色,提取蛋白进行Western Blot检测炎症相关蛋白TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β2表达水平以及抗凋亡蛋白Bcl2表达水平。通过观察各组小鼠的存活率,血清学变化,肝脏组织形态学变化,反映h EMSCs治疗ALF的效果。通过DHE染色检测不同组小鼠氧化应激水平;Western Blot检测不同组小鼠肝脏炎症相关蛋白TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β2的表达差异及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达差异,探索h EMSCs治疗ALF的可能机制。结果:1.按照4ml/kg的注射剂量一次性腹腔注射50%体积分数的CCl4,可以成功建立C57小鼠急性肝衰竭模型:与注射橄榄油的空白对照组(oil组)相比,各模型组小鼠存活率明显下降(p<0.05);注射50%的CCl44h后模型组小鼠血清ALT水平明显升高(p<0.0001);AST水平亦明显升高(p<0.0001)。2.ALF模型建立后,PBS治疗组小鼠存活率最低,ALF后1day之内大量死亡;而Oil组观察全程无死亡出现。进行细胞移植的EMSC组小鼠和BMSC组小鼠存活率比PBS组有所提高,直至观察终点,移植h EMSCs的小鼠比移植h BMSCs的小鼠存活率高。h EMSCs治疗组可显著提高ALF后小鼠的存活率(p<0.05)。3.在细胞移植后1day,EMSC组、BMSC组与PBS组相比,ALT水平显著降低(p<0.0001);EMSC组与PBS组相比,AST水平显著降低(p<0.05)。EMSC组与PBS组相比,ALP水平显著降低(p<0.001);BMSC组与PBS组相比,ALP水平显著降低(p<0.01)。在细胞移植后2day,EMSC组与PBS组相比,ALB水平显著提高(p<0.0001);EMSC组与BMSC组相比,ALB水平升高明显(p<0.01)。在细胞移植后2day,EMSC组、BMSC组、PBS组凝血酶原水平均比Oil组明显降低(p<0.05)。h EMSCs治疗和h BMSCs治疗可以改善ALF后小鼠的肝功能。4.肝脏组织切片,HE染色结果显示h EMSCs治疗和h BMSCs治疗可以恢复ALF后受损小鼠肝脏组织,减少肝脏坏死程度。EMSC组与PBS组相比,EMSC组损伤更轻(p<0.05);BMSC组与PBS组相比,BMSC组损伤更轻(p<0.05);EMSC组与BMSC组相比,无显著差异。5.DHE染色氧化应激水平检测中,EMSC组与PBS组相比,EMSC组表达水平更低(p<0.05),提示h EMSCs治疗可以显著降低损伤肝脏局部氧化应激水平。6.h EMSCs治疗和h BMSCs治疗可以调节炎症相关因子表达,PBS组与EMSC组相比,EMSC组TNF-α表达更低(p<0.01);PBS组与BMSC组相比,BMSC组TNF-α表达更低(p<0.05);PBS组与EMSC组相比,EMSC组IL-1β表达更低(p<0.001);PBS组与BMSC组相比,BMSC组IL-1β表达更低(p<0.05);EMSC组与BMSC组相比,EMSC组IL-1β表达更低(p<0.05)。PBS组与EMSC组相比,EMSC组抗炎因子IL-10、TGF-β2表达更高(p<0.05)。7.h EMSCs治疗可提高抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,PBS组与EMSC组相比,EMSC组Bcl-2表达更高(p<0.01)。结论:1.h EMSCs移植可以提高ALF小鼠存活率,减轻四氯化碳诱导的小鼠急性肝衰竭后的肝脏损伤。2.h EMSCs可能通过降低损伤肝脏氧化应激水平,降低肝脏局部炎症反应,减轻凋亡水平,从而减轻肝脏损伤。
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