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目的:肺癌是最常诊断的癌症,也是全球癌症相关死亡的主要原因。大约85%的肺癌患者具有非小细胞型肺癌的组织学特征,特点是增殖周期短、转移活性强、死亡率高。临床上,只有一小部分的非小细胞型肺癌患者能够在早期诊断,超过60%的肺癌患者在诊断时就出现了局部晚期或转移性疾病,手术切除已不再是最佳选择,此时肺癌患者的主要治疗方法是常规化学疗法和放射疗法。紫杉醇(Paclitaxel,PTX)是临床上最常见的抗癌药物之一,常用作非小细胞型肺癌临床化疗的一线抗癌药物。PTX抗肿瘤的机制是通过结合微管蛋白,稳定非功能性的微管束来阻断正常的有丝分裂和纺锤体发育,从而达到抑制肿瘤细胞生长的效果。然而,PTX的使用往往会带来严重副作用和多药耐药性,这些缺点降低了其抗肿瘤的作用。因此探索治疗非小细胞型肺癌的新型疗法具有十分重要的意义。蛋氨酸脑啡肽(Methionine enkephalin,MENK)是衍生自肾上腺素原激素脑啡肽的内源性阿片样五肽,是免疫系统和神经内分泌系统之间的重要调节因子,它与阿片受体(OGFr)结合后具有直接的抗肿瘤活性。根据以往的研究报道,MENK可抑制胃癌、胰腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、肝细胞癌和三阴性乳腺癌的生长。本研究以人肺癌A549细胞为研究对象,探讨MENK和PTX在不同浓度和不同时间下,单独用药以及联合用药时,对肺癌细胞A549的增殖和凋亡的影响。研究方法:1、采用CCK-8法检测MENK和PTX在不同浓度和不同时间下,单独用药以及联合用药时,对肺癌细胞A549增殖的影响。2、采用中效原理对MENK和PTX联合用药的效应进行评价。3、利用Hoechst33258荧光染色实验,观察MENK和PTX单独用药以及联合用药作用48h后,肺癌A549细胞在形态上的变化。4、利用流式细胞术,检测MENK和PTX单独用药以及联合用药作用48h后,各个实验组的细胞凋亡率。研究结果:1、与对照组相比,MENK作用24h后,浓度为6mg/ml、10mg/ml时,对细胞增殖的抑制效果比较明显,差异具有统计学意义。作用48h后,浓度为2mg/ml、6mg/ml以及10mg/ml时,对细胞增殖的抑制效果都比较明显,差异均具有统计学意义。无论是给药作用24h还是48h,浓度为10mg/ml的MENK组抑制作用均最强。2、与对照组相比,PTX作用24h和48h后,浓度为6ng/ml、10ng/ml时,对细胞增殖的抑制效果都比较明显,差异均具有统计学意义。其中,浓度为10ng/ml时,抑制效果最强。3、与对照组相比,MENK和PTX联合用药作用24h后,浓度为6mg/ml+6ng/ml、10mg/ml+10ng/ml时,对细胞增殖的抑制效果比较明显,差异具有统计学意义。作用48h后,浓度为2mg/ml+2ng/ml、6mg/ml+6ng/ml、10mg/ml+10ng/ml时,对细胞的增殖均有明显的抑制作用,差异均具有统计学意义。4、与单独用药组相比,作用24h后,MENK和PTX联合用药组抑制细胞增殖的效果略强,但是没有统计学意义。作用48h后,MENK和PTX联合用药组浓度为6mg/ml+6ng/ml、10mg/ml+10ng/ml时,抑制细胞增殖的效果比单独用药组更明显,且差异具有统计学意义。5、MENK和PTX联合用药对于人肺癌A549细胞增殖的抑制作用,在整个效应范围中CI<1,说明两药联合应用在整个浓度区间均产生协同效应。6、Hoechst33258荧光染色实验结果显示,空白对照组细胞核染色均匀,形状规则,基本未观察到细胞凋亡的发生。其他各实验组均观察到细胞核形状不规则,着色浓染,出现了凋亡形态学变化。其中,MENK与PTX联合用药组发生细胞凋亡的数量最多。7、流式细胞术检测空白对照组、MENK组、PTX组、MENK与PTX联合用药组的细胞凋亡率分别是1.53%、6.23%、6.04%、13.22%,联合用药组的细胞凋亡率明显高于单独用药组。结论:1.MENK组,PTX组,MENK与PTX联合用药组对肺癌A549细胞的增殖均有抑制作用,并且随着浓度的增加以及作用时间的延长,抑制作用也逐渐加强。2.MENK与PTX联合用药组相比于单独用药组而言,对A549细胞增殖的抑制作用更强,并且两药联用具有协同性。3.MENK组,PTX组,MENK与PTX联合用药组均能诱导肺癌A549细胞发生凋亡,并且MENK与PTX联合应用时诱导细胞凋亡的能力更强。