小麦赤霉病(Fusarium Head Blight,FHB)是一种流行范围广,危害力大的真菌病害,控制小麦赤霉病的发病不仅能够保障农作物的健康生长以及产量,而且对于食品营养与安全具有重要的意义。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种具有广阔前景的基因编辑技术,可以对无法通过基因敲除的必需基因进行基因沉默,即通过对目的基因进行干扰,使该基因的表达量在一定程度上被抑制,从而达到减弱基因表达的效果,减轻病害和产毒。本研究首先通过基因敲除验证了禾谷镰刀菌钙调神经磷酸酶基因CNA和CNB为必需基因,然后构建了FgCNA和FgCNB基因沉默载体,研究了其对禾谷镰刀菌生理功能的影响,并且通过体外合成双链RNA,喷施大麦叶片验证了其抑制镰刀菌侵染的效果,为小麦赤霉病的高效、绿色安全防控奠定了基础。主要研究结果如下:(1)通过基因敲除技术及原生质体转化无法获得敲除突变体,利用PCR技术验证了所有转化体均为异位插入突变体,证明FgCNA和FgCNB基因为敲除致死基因。(2)通过构建沉默载体,利用聚乙二醇(PEG)介导的原生质体转化方法,将沉默载体转化进禾谷镰刀菌PH-1中,筛选获得12株CNARNAi转化子,36株CNBRNAi转化子。(3)对沉默转化子进行生理功能测定,结果显示转化体在孢子长度及隔膜数、耐盐胁迫和耐碱胁迫上与禾谷镰刀菌PH-1相比无显著差异。部分突变体菌株与禾谷镰刀菌PH-1相比生长速度减缓,产孢能力减弱,产毒能力显著减弱,毒素产量明显减少。在使用小麦胚芽鞘的致病力测定中,部分沉默转化子发病程度减轻。(4)构建含有T7启动子的DNA模板,体外合成了FgCNA和FgCNB基因的双链RNA,通过大麦离体叶片的喷施,验证了其对禾谷镰刀菌PH-1抑制作用,结果显示,喷施CNAP1、CNAP2和CNB双链RNA的叶片病斑比对照更小,说明dsRNA具有较好的抗镰刀菌侵染的效果。