【摘 要】
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目的:本研究的目的是分析锦灯笼的成分组成,筛选出抗氧化和治疗骨质疏松症活性物质,对锦灯笼宿萼乙酸乙酯（F8）抗骨质疏松症的活性成分进行体内体外研究。方法:首先,采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱（UPLC Q-Orbitrap MS/MS）方法分析锦灯笼果实和宿萼醇提物的化学成分。用不同的极性溶剂对锦灯笼的宿萼和果实的化学组分提取分离测定,同时测定中性糖、酸性糖、黄酮类、甾醇、多酚和
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目的:本研究的目的是分析锦灯笼的成分组成,筛选出抗氧化和治疗骨质疏松症活性物质,对锦灯笼宿萼乙酸乙酯（F8）抗骨质疏松症的活性成分进行体内体外研究。方法:首先,采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱（UPLC Q-Orbitrap MS/MS）方法分析锦灯笼果实和宿萼醇提物的化学成分。用不同的极性溶剂对锦灯笼的宿萼和果实的化学组分提取分离测定,同时测定中性糖、酸性糖、黄酮类、甾醇、多酚和蛋白质的含量。此外,不同极性的物质成分通过超高效液相色谱-三重四极杆质谱（UPLC-QQQ-MS）仪器进行评估。提取锦灯笼果实的多糖,用PMP衍生化法测定单糖的组成。用H2O2对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞系建立体外氧化应激损伤模型,用浓度为12.5、25、50、100μg/m L的不同极性萃取层进行干预,分析测定其对细胞存活率的影响,并通过免疫蛋白印迹检测Keap1、Nrf2、HO-1、Bax、Bcl-2,caspase-3,ERK和p-ERK的蛋白表达。进一步以斑马鱼为动物体内模型,用不同浓度活性成分处理,检测H2O2诱导的斑马鱼体内ROS的变化,并用钙黄绿素荧光染色计算斑马鱼椎骨的荧光强度。结果:从锦灯笼醇提取物中共鉴定出23种化学成分,包括5种有机酸类、12种黄酮类、6种酸浆苦素类化合物,其中山奈甲黄素-3-O-葡萄糖苷和锦葵色素-3-O-葡萄糖苷是可能首次在锦灯笼中发现。通过UPLC-QQQ-MS对锦灯笼提取成分进行成分分析,结果发现F2层和F7层主要富含酸浆苦素类化合物,F8层主要富含黄酮类化合物,咖啡酸、异槲皮苷、木犀草素、槲皮素、芹菜素的含量相比于其他提取层较高,其中木犀草素最为明显。锦灯笼果实多糖中以阿拉伯糖的含量较高,推测为锦灯笼果实的主要单糖组成。通过筛选不同极性的成分,发现F8可以显着提高因H2O2损伤时成骨细胞的存活率。体外研究表明,与H2O2相比,各给药组H2O2诱导的氧化应激损伤得到有效保护,Keap1、Nrf2、Bax和caspase-3的表达降低,而Bcl-2和HO-1的表达升高。同时,F8处理引发了ERK蛋白的磷酸化。体内研究表明,与H2O2组相比,经过F8处理后斑马鱼胚胎ROS水平在72 hpf后显著降低,椎骨荧光面积在9 dpf后显著增加。结论:测定出锦灯笼中含有的23种化学成分,并且发现特有的酸浆苦素类化合物易溶于氯仿中,黄酮类化合物易溶于乙酸乙酯中,根据总成分分析结果推测多酚类化合物能够起到抗氧化作用,F8能够有效保护H2O2诱导的MC3T3-E1细胞损伤,激活Keap1/Nrf2/ARE和ERK信号通路,调节Bax、Bcl-2和caspase-3凋亡蛋白的表达。并且F8能够降低斑马鱼体内ROS的产生,增加斑马鱼椎骨的荧光面积。基于以上研究,我们推测F8可以作为治疗骨质疏松的潜在药物。
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