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目的：本研究通过体外模拟神经炎症反应，体内建立POCD动物模型，观察小胶质细胞活化情况，明确右美托咪定对POCD的治疗作用，以及初步探究SALL1/JARID2在右美托咪定改善POCD中的作用，以期为右美托咪定的临床应用提供新的分子机制以及为后续POCD机制的深入研究提供实验基础依据。
方法：1.采用0.1μg/ml和1μg/ml的脂多糖（LPS）诱导BV2细胞，MTT法检测诱导后6h，12h，24h，36h和48h后的细胞活力情况，探索模拟神经炎症反应的最佳LPS诱导浓度和时间。其后用0.1μM，1μM和10μM的右美托咪定（Dex）在LPS诱导前1小时预处理BV2细胞，MTT法检测细胞活力，探索最有效的Dex作用浓度。2.将BV2细胞随机分为对照组（Control组），脂多糖诱导组（LPS组）和右美托咪定处理组（Dex组），免疫荧光观察小胶质细胞活化标志物CD68的表达情况，实时定量免疫荧光聚合酶链反应（qRT-PCR）检测小胶质细胞M1/M2型标志物变化，qRT-PCR和蛋白印迹（Western blot）检测SALL1及其下游基因表达情况。3.选取60只C57BL/6雄性小鼠，随机分为三个组：假手术组（Sham组），模型组（Model组）和右美托咪定干预组（Dex组）。Sham组小鼠仅进行麻醉，不做胫骨骨折手术，Model组小鼠在吸入麻醉下行胫骨骨折髓内固定术，Dex组小鼠在麻醉前0.5h腹腔注射25μg/Kg的右美托咪定，其后行吸入麻醉下胫骨骨折髓内固定术。术后对3组小鼠进行Morris水迷宫实验评估认知功能状况，行为学检测结束后，取外周血，收集血清，心脏灌注后取脑组织。免疫荧光观察海马区小胶质细胞活化标志物Iba-1的表达情况，qRT-PCR检测小胶质细胞M1/M2型标志物变化，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清和海马组织中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的水平，qRT-PCR和Western blot检测海马组织中SALL1及JARID2的表达。
结果：1.0.1μg/ml和1μg/ml的LPS处理BV2细胞6h，12h，24h，36h和48h后，细胞活力结果表明，0.1μg/ml的LPS对BV2细胞诱导24h后细胞活力显著增加（P＜0.05）；0.1μM，1μM和10μM的Dex预处理BV2细胞，结果显示0.1μM的Dex可显著抑制BV2细胞活化（P＜0.05）。2.细胞实验结果显示，与Control组相比，LPS组小胶质细胞活化标志物CD68显著增加，BV2细胞显著活化，而Dex组小胶质细胞活化标志物CD68明显减少，BV2细胞活化程度明显降低。此外，LPS组小胶质细胞M1型标志物（iNOS和CD32）的mRNA水平较Control组明显增加，而与LPS组相比，Dex组iNOS和CD32的mRNA水平明显降低；与Control组比较，小胶质细胞M2型标志物（CD206和Arg1）的mRNA水平在LPS组显著降低，而与LPS组相比，Dex组CD206和Arg1的mRNA水平明显增加（P＜0.05）。Morris水迷宫实验结果显示，Model组小鼠的逃避潜伏期比Sham组长，Dex组小鼠的逃避潜伏期较Model组短（P＜0.05）；与Sham组相比，Model组小鼠的穿台次数明显减少，Dex组小鼠的穿台次数较Model组增多（P＜0.05）。免疫荧光显示，Model组小鼠海马区Iba-1的表达较Sham组增加，Dex组海马区Iba-1的表达较Model组减少。Model组iNOS和CD32的mRNA水平较Sham组明显增加，而Dex组两分子的表达较Model组明显降低（P＜0.05）；与Sham组比较，CD206和Arg1的mRNA在Model组显著降低，而两分子在Dex组中明显增加（P＜0.05）。ELISA检测显示，与Sham组相比，Model组小鼠的血清和海马组织中TNF-α和IL-6的水平明显增加，Dex组TNF-α和IL-6的水平较Model组显著降低（P＜0.05）；此外，Model组小鼠的血清和海马组织中IL-10的水平比Sham组明显降低，Dex组IL-10的含量较Model组显著增加（P＜0.05）。3.细胞实验结果显示，LPS组的SALL1和JARID2的mRNA水平比Control组显著降低，Dex组SALL1和JARID2的表达较LPS组显著增加（P＜0.05），而Dux，Mreg和Phc1的mRNA水平在三组中无显著差异（P＞0.05）。LPS组的SALL1和JARID2蛋白表达比Control组显著降低，Dex组SALL1和JARID2的蛋白表达较LPS组显著增加（P＜0.05）；此外，动物实验显示，与Sham组相比，Model组SALL1和JARID2的mRNA和蛋白表达均显著降低，Dex组SALL1和JARID2的mRNA和蛋白表达均较Model组显著增加（P＜0.05）。
结论：1.0.1μg/ml的LPS对BV2细胞诱导24h后BV2细胞显著活化，0.1μM的Dex可显著抑制BV2细胞活化。2.构建POCD模型后小胶质细胞显著活化，小胶质细胞M1型标志物和促炎细胞因子显著增加，M2型标志物和抗炎细胞因子表达降低；右美托咪定可显著改善小鼠术后认知功能障碍，抑制小胶质细胞活化，逆转小胶质细胞M1/M2型标志物和炎症因子的表达。3.SALL1在小胶质细胞活化时表达降低，其下游基因JARID2表达亦降低，右美托咪定可以使SALL1和JARID2的表达增加。
方法：1.采用0.1μg/ml和1μg/ml的脂多糖（LPS）诱导BV2细胞，MTT法检测诱导后6h，12h，24h，36h和48h后的细胞活力情况，探索模拟神经炎症反应的最佳LPS诱导浓度和时间。其后用0.1μM，1μM和10μM的右美托咪定（Dex）在LPS诱导前1小时预处理BV2细胞，MTT法检测细胞活力，探索最有效的Dex作用浓度。2.将BV2细胞随机分为对照组（Control组），脂多糖诱导组（LPS组）和右美托咪定处理组（Dex组），免疫荧光观察小胶质细胞活化标志物CD68的表达情况，实时定量免疫荧光聚合酶链反应（qRT-PCR）检测小胶质细胞M1/M2型标志物变化，qRT-PCR和蛋白印迹（Western blot）检测SALL1及其下游基因表达情况。3.选取60只C57BL/6雄性小鼠，随机分为三个组：假手术组（Sham组），模型组（Model组）和右美托咪定干预组（Dex组）。Sham组小鼠仅进行麻醉，不做胫骨骨折手术，Model组小鼠在吸入麻醉下行胫骨骨折髓内固定术，Dex组小鼠在麻醉前0.5h腹腔注射25μg/Kg的右美托咪定，其后行吸入麻醉下胫骨骨折髓内固定术。术后对3组小鼠进行Morris水迷宫实验评估认知功能状况，行为学检测结束后，取外周血，收集血清，心脏灌注后取脑组织。免疫荧光观察海马区小胶质细胞活化标志物Iba-1的表达情况，qRT-PCR检测小胶质细胞M1/M2型标志物变化，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清和海马组织中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10的水平，qRT-PCR和Western blot检测海马组织中SALL1及JARID2的表达。
结果：1.0.1μg/ml和1μg/ml的LPS处理BV2细胞6h，12h，24h，36h和48h后，细胞活力结果表明，0.1μg/ml的LPS对BV2细胞诱导24h后细胞活力显著增加（P＜0.05）；0.1μM，1μM和10μM的Dex预处理BV2细胞，结果显示0.1μM的Dex可显著抑制BV2细胞活化（P＜0.05）。2.细胞实验结果显示，与Control组相比，LPS组小胶质细胞活化标志物CD68显著增加，BV2细胞显著活化，而Dex组小胶质细胞活化标志物CD68明显减少，BV2细胞活化程度明显降低。此外，LPS组小胶质细胞M1型标志物（iNOS和CD32）的mRNA水平较Control组明显增加，而与LPS组相比，Dex组iNOS和CD32的mRNA水平明显降低；与Control组比较，小胶质细胞M2型标志物（CD206和Arg1）的mRNA水平在LPS组显著降低，而与LPS组相比，Dex组CD206和Arg1的mRNA水平明显增加（P＜0.05）。Morris水迷宫实验结果显示，Model组小鼠的逃避潜伏期比Sham组长，Dex组小鼠的逃避潜伏期较Model组短（P＜0.05）；与Sham组相比，Model组小鼠的穿台次数明显减少，Dex组小鼠的穿台次数较Model组增多（P＜0.05）。免疫荧光显示，Model组小鼠海马区Iba-1的表达较Sham组增加，Dex组海马区Iba-1的表达较Model组减少。Model组iNOS和CD32的mRNA水平较Sham组明显增加，而Dex组两分子的表达较Model组明显降低（P＜0.05）；与Sham组比较，CD206和Arg1的mRNA在Model组显著降低，而两分子在Dex组中明显增加（P＜0.05）。ELISA检测显示，与Sham组相比，Model组小鼠的血清和海马组织中TNF-α和IL-6的水平明显增加，Dex组TNF-α和IL-6的水平较Model组显著降低（P＜0.05）；此外，Model组小鼠的血清和海马组织中IL-10的水平比Sham组明显降低，Dex组IL-10的含量较Model组显著增加（P＜0.05）。3.细胞实验结果显示，LPS组的SALL1和JARID2的mRNA水平比Control组显著降低，Dex组SALL1和JARID2的表达较LPS组显著增加（P＜0.05），而Dux，Mreg和Phc1的mRNA水平在三组中无显著差异（P＞0.05）。LPS组的SALL1和JARID2蛋白表达比Control组显著降低，Dex组SALL1和JARID2的蛋白表达较LPS组显著增加（P＜0.05）；此外，动物实验显示，与Sham组相比，Model组SALL1和JARID2的mRNA和蛋白表达均显著降低，Dex组SALL1和JARID2的mRNA和蛋白表达均较Model组显著增加（P＜0.05）。
结论：1.0.1μg/ml的LPS对BV2细胞诱导24h后BV2细胞显著活化，0.1μM的Dex可显著抑制BV2细胞活化。2.构建POCD模型后小胶质细胞显著活化，小胶质细胞M1型标志物和促炎细胞因子显著增加，M2型标志物和抗炎细胞因子表达降低；右美托咪定可显著改善小鼠术后认知功能障碍，抑制小胶质细胞活化，逆转小胶质细胞M1/M2型标志物和炎症因子的表达。3.SALL1在小胶质细胞活化时表达降低，其下游基因JARID2表达亦降低，右美托咪定可以使SALL1和JARID2的表达增加。