目的:本文探讨金钗石斛生物碱(Dendrobine)联合二烯丙基硫化物诱导乳腺癌细胞Mcf-7凋亡,并探究细胞发生凋亡的途径。方法:(1)金钗石斛生物碱和二烯丙基硫化物分别作用Mcf-7细胞,MTT验证Mcf-7细胞对两种药物的抑制作用。(2)Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术(Flowcytometry,FCM)检测细胞凋亡率,生物碱和二烯丙基硫化物诱导Mcf-7细胞,发生早期凋亡,定量检测细胞凋亡率。(3)碘化丙碇PI染色细胞,流式细胞术(Flowcytometry,FCM)测定细胞周期。(4)JC-1探针荧光共聚焦CONFOCAL观察细胞线粒体跨膜电位变化。(5)荧光免疫印迹法WensternBlot测定细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)蛋白,Bcl-2蛋白白、Bax蛋白。结果:(I)MTT实验发现二烯丙基硫化物对乳腺癌细胞的生长活抑制作用高于金钗石斛生物碱的抑制作用,有效作用浓度分别为0.1 mg/ml、0.2 mg/ml、0.1mg/ml+0.2mg/ml。(2)生物碱诱导Mcf-7细胞,流式细胞术检测早期凋亡率分别为10.58%、1 1.03%、16.69%。二烯丙基硫化物作用细胞发生早期凋亡率分别为33.96%、40.73%、51.46%。两种药物联合作用效果最佳,凋亡率为73.84%。(3)二烯丙基硫化物诱导Mcf-7细胞发生细胞周期阻滞现象,主要发生在G2/M期。金钗石斛生物碱阻滞细胞周期发生在G1/M期。(4)二种药物联合作用细胞,Mcf-7线粒体发生去极化现象最为明显,提示线粒体膜电位发生变化,引起凋亡因子释放,进入胞浆使得细胞启动死亡机制,发生级联反应。(5)WB 检测 Bax、Bcl-2、CDK1、CyclinB1、caspase-3 蛋白因子,二烯丙基硫化物作用Mcf-7细胞调控细胞周期蛋白的表达,抑制肿瘤细胞增殖在G2/M期。金钗石斛生物碱诱导Mcf-7细胞,WB检测发现Bcl-2蛋白表达量下调,而促凋亡蛋白Bax表达量上调,执行凋亡因子caspase-3随着浓度的增大表达量增加。结论:(1)金钗石斛生物碱诱导mcf-7细胞凋亡通过线粒体途径发生,抑凋亡Bcl-2蛋白表达量下调,促凋亡Bax蛋白表达量上调,caspase-3被激活使得细胞发生级联反应,导致细胞发生凋亡。(2)二烯丙基硫化物对Mcf-7细胞的抑制增殖则是通过抑制细胞周期调控蛋白CDK1和CyclinB1的表达,从而实现阻滞细胞周期。意义:已证实二烯丙基硫化物对肿瘤细胞具有抗癌作用,但金钗石斛生物碱对乳腺癌细胞诱导凋亡作用并未见报道,二种药物联合作用进一步探究细胞凋亡的途径,为临床治疗和中药辅助治疗奠定药理学基础。