为了阐明中药何首乌（Polygonum mutiflorum Thunb.）中单体有效成分2，3，5，4＇-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（以下简称二苯乙烯苷）在体内的吸收、分布、代谢、排泄等规律，为临床合理用药提供依据，我们从中药何首乌中提取分离单体成分二苯乙烯苷，以大鼠为研究对象，通过静脉注射和灌胃两种给药途径，采用高效液相色谱技术，研究其在大鼠体内的吸收，分布，代谢，排泄过程。目的：建立何首乌中二苯乙烯苷单体成分的提取分离方法，获得可满足药代动力学实验纯度要求的单体成分；建立大鼠血浆及组织中二苯乙烯苷浓度的RP-HPLC测定方法，研究何首乌中二苯乙烯苷在大鼠体内的吸收、分布、代谢、排泄情况。方法：（1）以硅胶柱色谱法，乙酸乙酯-石油醚梯度洗脱，自何首乌中提取分离二苯乙烯苷单体成分。（2）生物样本中药物浓度的测定方法：采用RP-HPLC测定生物样本中二苯乙烯苷的浓度。（3）色谱条件的确定：选择固定相，并对流动相的组成、配比、流速等因素进行分析，确定最佳色谱条件。（5）生物样本的预处理：取大鼠血浆及组织匀浆，置具塞离心管中，加甲醇沉淀蛋白，涡流混旋振荡30s，离心10min<WP=5>（4000r·min-1），吸取上清液，0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液，注入液相色谱仪，记录峰面积，以标准曲线法进行定量。（6）方法的选择性：取二苯乙烯苷对照品溶液、大鼠空白血浆、加入二苯乙烯苷对照品的空白血浆、按照已确定的色谱条件注入色谱仪，记录色谱图。（7）标准曲线的制备：取大鼠空白血浆0.2mL，加入不同浓度的二苯乙烯苷对照品溶液0.4mL，涡流混旋，离心，取上清液，制得一系列空白血浆对照溶液，记录二苯乙烯苷的峰面积，同法制得二苯乙烯苷在各个组织中的标准曲线。（8）最低检测限试验：以信噪比S/N≥3时相应的二苯乙烯苷的浓度定为最低检测浓度。（9）回收率试验：取大鼠空白血浆，加入不同浓度二苯乙烯苷对照品溶液，每个浓度5份，记录二苯乙烯苷的峰面积。（10）精密度试验：取大鼠空白血浆，加入不同浓度的标准二苯乙烯苷对照品溶液，每个浓度5份，一天之内不同时间进行测定，计算样品的日内精密度；另配制上述3种浓度的溶液5份，分别于不同日进行测定，于一周内完成，计算样品的日间精密度。（11）稳定性试验：样品溶液分别放置0，2，4，6，8，10，12和24h，于不同时间分别进样20μL，记录峰面积。（12）二苯乙烯苷在大鼠体内吸收实验设计：取禁食12h自由饮水的SD大鼠24只，随机分为静注组和灌胃组，每组又分为高低两个剂量组，每个剂量组6只，即刻用乙醚轻度麻醉，行颈动脉插管术，按20mg·kg-1、10mg·kg-1静注二苯乙烯苷注射液，分别于0、2、5、10、15、20、30、45、60、90、120min经颈动脉导管取血；按100mg·kg-1、50mg·kg-1的剂量灌胃给予二苯乙烯苷液，分别于0、5、15、30、45、60、90、120、150、180min取血，每次取血0.5mL，<WP=6>4000r·min-1离心5min，分取血浆0.2mL，加甲醇沉淀蛋白，涡流混旋振荡30s，离心10min（4000r·min-1），吸取上清液，0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液，注入液相色谱仪，记录各样品的峰面积，计算血浆药物浓度。（13）药物动力学参数的获得：采用3P97药动学软件进行自动拟合处理，以理论血药浓度值与实验测定值的相关系数最大和AIC最小作为判断标准，选择最佳房室模型。（14）组织分布：取雄性大鼠24只，随机分成静注组和灌胃组，分别以iv 10mg·kg-1或ig 50mg·kg-1给予二苯乙烯苷，于给药后10min，1h及2h后将动物处死，取出各组织制备组织匀浆，并测定血药浓度；根据标准曲线计算出每克组织中的含药量。（15）胆汁排泄：取大鼠4只，禁食12h，以100mg·kg-1灌胃二苯乙烯苷，行胆道插管术，每4h以刻度试管收集胆汁，记录体积，收集12h。（16）尿液、粪便排泄：取大鼠4只，置代谢笼中，禁食12h，预先收集空白尿液及粪便，以50mg·kg-1灌胃二苯乙烯苷，每4h收集尿液及粪便。结果：（1）经多次硅胶色谱柱分离后，获得含量为90.25%的二苯乙烯苷单体成分（峰面积外标法）。（2）生物样品测定：最佳色谱条件为C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；Waters 2487紫外检测器；乙腈-甲醇-1%甲酸溶液（15﹕18﹕67）；检测波长：320nm；流速：1.0mL·min-1；灵敏度：0.05AUFS，进样量为20μL。（3）系统适用性试验：在上述色谱条件下，二苯乙烯苷峰分离良好，血浆中杂质及内源性物质均不干扰测定，且灵敏度高，样品中二苯乙烯苷的理论塔板数均大于6000，保留时间为10.8min左右，与相邻色谱峰的分离度均大于3。（4）标准曲线的绘制：以血浆中药物<WP=7>浓度（μg·mL-1）为横坐标，峰面积（×105）为纵坐标，实验数据经线性回归得知二苯乙烯苷浓度在0.121~193.2μg·mL-1范围内与峰面积有良好的线性关系，回归方程为Y=0.8763X－0.0976，r=0.9989（n＝8）。（5）最低检测浓度为0.0121μg·mL-1。（6）高、中、低3种不同浓度的平均回收率分别为（98.63±6.06）%、（100.8±2.46）%、（106.4±5.08）%。（7）高、中、低3种浓度样品的日内精密度分别为1.8%、2.7%、7.3%，日间精密度为2.2%、3.2%、9.3%。（8）样品溶液分别放置0，2，4，6?